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技术文章
人(Human)IL-37ELISA试剂盒酶免检疫方法
点击次数:138 发布时间:2019/6/18 9:03:26
人(Human)IL-37elisa试剂盒酶免检疫方法
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人白细胞介素37(IL-37)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人白细胞介素37(IL-37)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。
(此图仅供参考)
人白细胞介素37(IL-37)ELISA试剂盒性能
1. 检测范围:1 pg/mL – 32 pg/mL。
2. 灵敏度:检测浓度小于0.1 pg/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
原创作者:上海仁捷生物科技有限公司