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上海仁捷生物科技有限公司 主营产品:ELISA检测试剂盒,进口标准品对照品,抗体,生化试剂等

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技术文章

线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性测试盒

点击次数:265 发布时间:2021/5/7 21:23:56

线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性测试盒
 测定意义:线粒体复合体Ⅴ又称F1F0-ATP合酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成,也可逆过程水解ATP。此外,复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。

测定原理:复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi,通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。

需要的仪器,耗材:可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。


线粒体呼吸链复合体Ⅴ活性测试盒
样本处理


1. 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1.0 mL 提取液,用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

2. 4 ℃ 600g 离心 10min。

3. 将上清液移至另离心管中,4 ℃ 11000g 离心 15min。

4. 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅴ(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。

5. 在沉淀中加入 600μL 试剂,超声波破碎(功率 20%,超声 5 ,间隔 10 ,重复 12 次),用于复合体Ⅴ酶 活性测定,并且用于蛋白含量测定。

原创作者:上海仁捷生物科技有限公司

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