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DEPC 操作误区你了解多少吗?
点击次数：287 发布时间：2018/9/3 13:36:41
误区一：重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。
由于 DEPC 较贵，而且书上说 DEPC 要用高压灭菌处理去除，于是有些人就萌发了重复使用 DEPC 的想法，即对含有 DEPC 的水不进行高压灭菌，从而重复使用含 DEPC 的水处理枪头、离心管等。
节约本是好事，但这样的节约是无效的。为什么不能重复使用含 DEPC 的水？因为 DEPC 在水溶液中不稳定，极易分解，DEPC 在 pH 6.0 和 pH 7.0 的 PBS 缓冲液中的半衰期分别约为 20 min 和 10 min，DEPC 在水中的半衰期约为 30 min。因此，重复使用含 DEPC 的水就不能保证枪头和离心管的 RNase-free。
误区二：必需长时间高压灭菌来彻底去除 DEPC。
用 DEPC 处理过的溶液，在 15－20 min 的高压灭菌后还可以闻到一股特殊的香味，因此有人认为高压灭菌去除 DEPC 不彻底，所以要延长高压灭菌的时间以完全去除 DEPC。
但是延长高压灭菌的时间并不需要，因为闻到的特殊香味不是 DEPC 的，而是 DEPC 分解产物的乙醇同溶液中残留的微量的羧酸（如甲酸和乙酸等）反应产生的挥发性脂类。这种特殊的水果香味不代表有痕量的 DEPC 残留。
误区三：溶液中 DEPC 含量约高，灭活 RNase 的效果越好。
这个误区错了一半，的确，1% DEPC 能灭活高达 1000 ng/ml 的 RNase A，而 0.1% DEPC 只能灭活少于 500 ng/ml 的 RNase A。但是溶液中残留的 DEPC 副产物会抑制一些酶反应，例如 DEPC 副产物会抑制体外转录反应，因此 DEPC 含量越高，高压灭菌后的 DEPC 副产物就越多，抑制越明显。
原创作者：上海远慕生物科技有限公司
