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BL21(DE3)pLysS感受态细胞详细说明
点击次数：92发布时间：2017/12/5 13:27:21
更新日期：2020/1/10 12:05:03
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
中文名： BL21(DE3)pLysS感受态细胞
供应商：上海远慕
规格：10×100ul
分类：感受态制备
保存：—20℃,12个月
用途：基因克隆表达
说明：BL21(DE3)pLysS受体菌含有表达T7溶菌酶的基因,适合毒性蛋白和非毒性蛋白的表达
BL21(DE3)pLysS感受态细胞详细说明：
BL21(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，能够降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达，适合表达毒性蛋白和非毒性蛋白。该菌株染色体整合了λ噬菌体DE3区(DE3区含有T7噬菌体RNA聚合酶)。BL21(DE3)pLysS 感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率高达108 cfu/µg DNA。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞操作流程：
1. BL21(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入 目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm 复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含 34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
6.根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
7.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
公司介绍：
远慕生物现货供应进口/国产ELISA试剂盒，标准品对照品，动物血清血浆，质粒载体，质粒提取试剂盒，金标检测试剂盒，培养基，抗体，染色液，溶液，抗生素，抗生素， 维生素，有机试剂，无机试剂，环保试剂，化学试剂，生化试剂，实验耗材，液体试剂，细胞培养，其他科研试剂等，提供ELISA试剂盒免费代测服务，品种齐全，了解更多试剂详情请来电洽谈！
6. BL21(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞操作流程：
1. BL21(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入 目的DNA（质粒或连接产物）并用手拨打EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打)，冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB)，混匀后37℃，200rpm 复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含 34 µg/ml氯霉素及所选质粒筛选抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
6.根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的 SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。
7.待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA（根据实际情况加入适量的DNA，通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和），用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
公司介绍：
远慕生物现货供应进口/国产ELISA试剂盒，标准品对照品，动物血清血浆，质粒载体，质粒提取试剂盒，金标检测试剂盒，培养基，抗体，染色液，溶液，抗生素，抗生素， 维生素，有机试剂，无机试剂，环保试剂，化学试剂，生化试剂，实验耗材，液体试剂，细胞培养，其他科研试剂等，提供ELISA试剂盒免费代测服务，品种齐全，了解更多试剂详情请来电洽谈！
BL21(DE3)pLysS感受态细胞注意事项：
1. 感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少*终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，*佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
1. 感受态细胞在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒可相应减少*终用于涂板的菌量。
4. 诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5. 为获得需要量的蛋白，*佳诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
6. BL21(DE3)pLysS 菌株携带 pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34 µg/ml氯霉素，以防质粒丢失。
BL21(DE3)pLysS感受态细胞相关产吕如下：
DH5α受体菌
DH5α受体菌
DH5α感受态细胞
BL21(DE3)感受态细胞
琼脂结冷胶混合物｜植物凝胶
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BL21(DE3)受体菌
BL21(DE3)pLysS受体菌
BL21(DE3)pLysS感受态细胞
HB101受体菌
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JM109感受态细胞
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Top10感受态细胞
细胞松弛素B储存液（Cytochalasin B,1mg/ml）
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Top10受体菌
Rossita感受态细胞
转化储存液(2×TSS,pH6.5)
磷酸缓冲盐溶液（10×PBS,无钙镁）
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