大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒操做方法样本处理及要求：

1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

注意事项：

1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。

2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。

3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。

4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。

5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。

6. 在储存和温育时避免强光直接照射。

7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。

8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。

9. 不能使用过期产品。

10. 如果可能传播，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。

     

     大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒操做方法

    试剂准备：

    试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。

    20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。

     

    操作步骤：

1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.   样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

     每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值

大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒操做方法说明：

由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

1. 终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。

2. 不同批次的同一产品可能会有少许差别，如：检测限、灵敏度以及显色时间等，请依据试剂盒内说明书进行实验操作，网站电子版说明书仅作参考。

3. 只有全部使用本试剂盒配套试剂才能保证检测效果，不能混用其他制造商的产品。只有严格遵守本试剂盒的实验说明才会得到的检测结果。

4. 本公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。

5. 使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。

6. 若样本为细胞培养上清，因该类样本干扰因素较多，如：细胞状态、细胞数量、采样时间等，所以可能存在检测不出的情况。

   某些天然蛋白或重组蛋白，包括原核及真核重组蛋白，可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配，而不被检测出。贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
   有效期：6个月
   用途：本产品仅供科学研究
   规格：48T/96T（可提供免费代测服务）
   1．准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
   2．灵敏度：检测浓度小于10 pg/ml。
   3．特：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
   4．重复性：板内、板间变异系数均小于15%。问题回答

   大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒操做方法组成:

   1、酶联板（assay plate ）：一块（96孔或者48孔）。
   2、标准品（standard）：2瓶（冻干品）。
   3、样品稀释液（sample diluent）：1×20ml/瓶。
   4、生物素标记抗体稀释液（biotin-antibody diluent）：1×10ml/瓶。
   5、辣根化物酶标记亲和素稀释液 （hrp-idin diluent）：1×10ml/瓶。
   6、生物素标记抗体（biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
   7、辣根化物酶标记亲和素（hrp-idin）：1×120μl/瓶（1：100）
   8、底物溶液（tmb substrate）：1×10ml/瓶。
   9、浓洗涤液（wash buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
   10、终止液（s solution）：1×10ml/瓶（2n h2so4）。问：新鲜采集后直接零下20度冻存的可以呗，放在95%的酒精里保存的样品可以吗？
   答:可以的
   问：我们算出来的ACH含量为什么出现负值?
   答：说明个别样本的浓度很低，当浓度接近第6个点的时候 直线方程就有可能计算出负值
   问：一个孔需要多少量的血清?
   答：一个孔上样量微升。
   问：那标准品出现跳孔是怎么回事?
   答：你完全可以拿同样的标准品再重新做一次 ，做之摇匀一下，肯定可以做好 。那是操作问题了 ，你可以再做一次的，之也有客户出现过类似的问题 学生做了2次都没做好 后来老师自己做 就是摇匀了一下，其他操作都一样 标准曲线做的很。1.标准品的稀释与加样
   2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
   3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
   4.配液：将30（48t的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48t的20倍）倍稀释后备用。
   5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
   6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
   7.温育：操作同3。
   8.洗涤：操作同5。
   9.显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
   10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
   11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。测定应在加终止液后15分钟以内进行。

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