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技术文章
推送:人Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6/MUC1)elisa试剂盒
点击次数:17102 发布时间:2023/2/21 11:52:02
推送:人Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6/MUC1)elisa试剂盒检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6/MUC1)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6/MUC1)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1. 血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3. 细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆:
1)、取组织块(0.1g~0.5g)少可到5~10mg在冰冷的PBS中漂洗,滤纸拭干,准确称重,放入5ml的匀浆管中。
2)、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质于匀浆管中,冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。
3)、匀浆的方式:手工匀浆,机器匀浆。
① 手工匀浆:左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中,右手将捣杆垂直插入套管中,上下转动研磨数十次(6~8分钟),充分研碎,制成10%的匀浆液。
② 机器匀浆:用组织捣碎机10000~15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆,也可用内切式组织匀浆机制备(匀浆时间10/次,间隙30,连续3~5次,在冰水中进行,可适当延长匀浆时间),镜检观察:
4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机3000转/分左右,离心10~15分钟,取上清液进行测定.
匀浆介质 一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。
5. 保存:如果样本收集后不能及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
推送:人Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6/MUC1)elisa试剂盒操作注意事项
1. 试剂盒保存在2-8℃,使用室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶溶解后再使用。
2. 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
3. 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,终结果乘以5才是样本实际浓度。
4. 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5. 所有液体组分使用充分摇匀。
推送:人Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6/MUC1)elisa试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:检测浓度小于1.0 pg/mL。
3. 特:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
Performance
1. Accuracy: the correlation coefficient R value between the standard linear regression and the expected
concentration is greater than or equal to 0.9900.
2. Sensitivity: the minimum detection concentration is less than 1.0 pg/mL.
3. Specificity: It does not cross react with other soluble structural analogues.
4. Repeatability: coefficient of variation within and between plates is less than 15%.
5. Storage: 2-8 ℃, protected from light and moisture.
6. Validity: 6 months
原创作者:上海臻科生物科技有限公司