报道：人Ⅱ型胶原N端肽(PⅡNP）elisa试剂盒检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被Ⅱ型胶原N端肽(PⅡNP）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的Ⅱ型胶原N端肽(PⅡNP）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：

1）、取组织块（0.1g～0.5g）少可到5～10mg在冰冷的PBS中漂洗，滤纸拭干，准确称重，放入5ml的匀浆管中。 
2）、按重量(g):体积(ml)=1:9的比例加入9倍体积的匀浆介质于匀浆管中，冰水浴条件下,用眼科小剪尽快剪碎组织块。 
3）、匀浆的方式：手工匀浆，机器匀浆。 
① 手工匀浆：左手持匀浆管将下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手将捣杆垂直插入套管中，上下转动研磨数十次（6～8分钟），充分研碎，制成10%的匀浆液。 
② 机器匀浆：用组织捣碎机10000～15000 转/分 上下研磨制成10%组织匀浆，也可用内切式组织匀浆机制备（匀浆时间10/次，间隙30，连续3～5次，在冰水中进行,可适当延长匀浆时间），镜检观察:
4、将制备好的10%匀浆液用普通离心机或低温低速离心机3000转/分左右,离心10～15分钟，取上清液进行测定.
匀浆介质  一般采用0.05 mol/L Tris-HCl, pH 7.4 磷酸盐缓冲液(PBS),客户可根据样本及测定指标的情况自行设定浓度,目的是保持样本的等渗环境。

5. 保存：如果样本收集后不能及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

报道：人Ⅱ型胶原N端肽(PⅡNP）elisa试剂盒操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用充分摇匀。

报道：人Ⅱ型胶原N端肽(PⅡNP）elisa试剂盒性能

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.  特：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6个月

Performance
1. Accuracy: the correlation coefficient R value between the standard linear regression ａnd the expected
concentration is greater than or equal to 0.9900.
2. Sensitivity: the minimum detection concentration is less than 1.0 pg/mL.
3. Specificity: It does not cross react with other soluble structural analogues.
4. Repeatability: coefficient of variation within ａnd between plates is less than 15%.
5. Storage: 2-8 ℃, protected from light ａnd moisture.
6. Validity: 6 months

查找:人Ⅱ型胶原螺旋肽(HELIX-Ⅱ）elisa试剂盒

原创作者：上海臻科生物科技有限公司