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上海臻科生物科技有限公司 主营产品:elisa试剂盒,动物血制品,抗体,标准品,检测卡,生化试剂等实验耗材

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技术文章

人SalusinBeta(Salusinβ)elisa试剂盒文献

点击次数:17091 发布时间:2023/2/28 11:52:07

人SalusinBeta(Salusinβ)elisa试剂盒文献检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被SalusinBeta(Salusinβ)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的SalusinBeta(Salusinβ)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD 值),计算样品浓度。

样品收集、处理及保存方法

1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2.血浆:EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4.细胞培养物上清:1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

5.其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测。

6.样品外观:样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。

7.样品保存:样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

自备物品

1. 酶标仪(450nm)

2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37恒温箱
人SalusinBeta(Salusinβ)elisa试剂盒文献

人SalusinBeta(Salusinβ)elisa试剂盒文献操作步骤:

1.从室温平衡60min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4

2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL。

3.样本孔待测样本50μL;空白孔不加。样本如需稀释,按照要求用试剂盒配套样本稀释液稀释样本。

4.每孔加入生物素标记抗体50μL,用封板膜封住反应孔,37水浴锅或恒温箱温育30min;标准孔空白孔不加!

5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

6.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37水浴锅或恒温箱温育30min。

7.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液350μL,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。

8.每孔加入底物A、B各50μL,37避光孵育15min

9.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值

实验计算结果

绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

人SalusinBeta(Salusinβ)elisa试剂盒文献性能

1.  准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。

2.  灵敏度:检测浓度小于1.0 pg/mL。

3.  特:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性:板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏:2-8,避光防潮保存。

6.  有效期:6个月

技术小提示

1.当混合或重溶蛋白溶液时,尽量避免起沫。

2.为了避免交叉感染,配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。

3.每次孵育时,请正确使用封板胶可结果的准确性。

4.混合后的显色底物在上板应为无色,请避光保存;假如微孔板后,将由物色变成不同深度的蓝色。

5.终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致;加入终止液后,孔内颜色由蓝变黄;若孔内有绿色,则表明孔内液体未混匀;请充分混合。

 

 


人SalusinAlpha(Salusinα)elisa试剂盒技术交流

原创作者:上海臻科生物科技有限公司

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