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人血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA检测试剂盒
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详细内容
一、人血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA检测试剂盒实验原理
5月21日消息,上海臻科报道:人血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA检测试剂盒是采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被人血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的人血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
二、人血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA检测试剂盒产品优势
1.品种齐全、质量可靠、灵敏度高、稳定性好、操作简便。
2.特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
3.重复性:板内变异系数小于10% ,板间变异系数小于15% 。
4.同城(上海)需要代测可免费上门取样,享送货上门的服务。
5.根据客户需求可以根据客户的要求定制elisa试剂盒。
6.臻科生物可提供全方位的售前、售中、售后技术支持,为您解决实验过程中遇到的问题。
三、人血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA检测试剂盒标本要求
1.血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3.组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。Zui后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。注:标本溶血会影响zui后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
四、试剂盒组成
名称 |
96孔配置 |
48孔配置 |
备注 |
微孔酶标板 | 12孔×8条 | 12孔×8条 | 无 |
标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
样本稀释液 |
6mL |
3mL | 无 |
检测抗体-HRP |
10mL |
5mL | 无 |
20×洗涤缓冲液 |
25mL |
15mL | 按说明书进行稀释 |
底物A |
6mL |
3mL | 无 |
底物B |
6mL |
3mL | 无 |
终止液 |
6mL |
3mL | 无 |
封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
五、操作流程
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液(350μL),静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
六、注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印,否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色,已经变蓝的底物液不能使用。
5. 封板膜只限一次性使用,避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。底物请避光保存
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
七、关于人血浆胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA检测试剂盒承诺
公司长期与各大高校、医院及权威科研单位保持着良好的合作关系,公司的产品质量及服务态度得到了他们的一致认可。臻科生物本着客户至上的原则为客户提供优质产品,公司承诺产品有任何质量的问题免费包退换(非人为因素造成的)。公司提供免费代测服务,并且承诺收到样本七个工作日出结果,确保数据的准确性。详情可联系我司客服了解。