人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)elisa试剂盒上海润裕生物科技有限公司等科研产品，我公司ELISA试剂盒和免疫组化试剂盒产品质量可靠，ELISA试剂盒(酶联免疫分析试剂盒)专业技术团队提供免费代测服务及售后指导。所以生物试剂产品用于科研实验领域，如有需要请直接来电或给我们留言（半个工作日内给您回复）。

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主要成分:酶标板,试剂,标准品等

性状：盒装液体

ELISA试剂盒实验标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。

ELISA试剂盒种属齐全：人、大鼠、小鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、羊、鸡、鸭、鱼等。

产品运输方面：部分现货供应，一般为快递运输，江浙沪隔天到，外地及偏远地方三至五天时间到货

2、检测原理：采用双抗体夹心ABC-ELISA法。

3、服务承诺：工作时间内免费技术咨询和指导，提供来样检测及免费代测服务，保证实验结果的有效性。

4、研究领域：炎症研究、神经生物学、肿瘤研究、新陈代谢、信号通路、免疫学、传染病、其他研究。

如果人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒所检测的样本不是连续的，所以实验中不用的板条立即放回包装中，密闭封口，4℃可保存1个 月。其余不用试剂应包装好或盖好。在做样本检测前要有一个完整的计划，如标本编号、所测项目、目的等。操作时尽量使用一次性的吸头，避免交叉污染。

主要分为以下系列：

1、细胞因子检测试剂盒

2、内分泌检测试剂盒

3、肝纤维化检测试剂盒

4、心肌梗塞检测试剂盒

5、肿瘤标志物检测试剂盒

6、自身免疫检测试剂盒

7、优生优育检测试剂盒

8、传染病检测试剂盒等等。

人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒操作步骤

方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O·D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O·D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

方法二　用于检测未知抗体的间接法：

用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中，加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗涤,*后一遍用DDW洗涤。其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。

人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒注意事项

1.　正式试验时，应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件，待检样品应作一式二份，以保证实验结果的准确性。有时本底较高，说明有非特异性反应，可采用羊血清、兔血清或BSA等封闭。

2.　在人穿孔素/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA试剂盒实验中，选择好各项ELISA实验条件是很重要的，其中包括:

(1)　固相载体的选择：许多物质可作为固相载体，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体，在使用前均可进行筛选：用等量抗原包被，在同一实验条件下进行反应，观察其显色反应是否均一性，据此判明其吸附性能是否良好。

(2) 包被抗体(或抗原)的选择：将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时，要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0～9.6之间。吸附温度，时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18～24小时。蛋白质包被的*适浓度需进行滴定：即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后，在其它试验条件相同时，观察阳性标本的OD值。选择OD值而蛋白量*少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1～10μg/ml。

(3)　酶标记抗体工作浓度的选择：首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)。然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。

(4)　酶的底物及供氢体的选择：对供氢体的选择要求是价廉、安全、有明显地显色反应，而本身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用，应注意防护。有条件者应使用不致癌、灵敏度高的供氢体，如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体。底物作用一段时间后，应加入强酸或强碱以终止反应。通常底物作用时间，以10-30分钟为宜。底物使用液必须新鲜配制，尤其是H2O2在临用前加入。

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