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代销小鼠抗核抗体ELISA 检测试剂盒
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上 传 者：上海信然生物技术有限公司
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小鼠抗核抗体ELISA 检测试剂盒
本试剂仅供研究使用 标本：血清或血浆
试验原理：
ANA试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知ANA浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将ANA和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物，然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中ANA的浓度呈比例关系。
自备材料
1． 蒸馏水。
2． 加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3． 振荡器及磁力搅拌器等。
小鼠抗核抗体ELISA 检测试剂盒
安全性
1． 避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体，请尽快用水冲洗。
2． 实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。
3． 不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
操作注意事项
1． 试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。
2． 实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。
3． 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4． 使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。
5． 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6． 洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。
7． 底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。
8． 加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。
9． 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
小鼠抗核抗体ELISA 检测试剂盒
样品收集、处理及保存方法
1、 血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2、 血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、 细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、 组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟，取上清液
5、 保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
试剂的准备
1． 标准品：标准品的系列稀释应在实验时准备，不能储存。稀释前将标准品振荡混匀。稀释比例按下表中进行：
400 IU/ml （6号标准品） 原倍浓度不用稀释直接加入50ul。
200 IU/ml （5号标准品） 100ul的原倍标准品加入100ul的标准品稀释液
100 IU/ml （4号标准品） 100ul的5号标准品加入100ul的标准品稀释液
50 IU/ml （3号标准品） 100ul的4号标准品加入100ul的标准品稀释液
25 IU/ml （2号标准品） 100ul的3号标准品加入100ul的标准品稀释液
12.5 IU/ml （1号标准品） 100ul的2号标准品加入100ul的标准品稀释液
0 IU/ml （空转移趋化生长因子β1对照） 原始浓度不用稀释直接加入50ul。
2． 洗涤缓冲液（50×）的稀释：蒸馏水50倍稀释。
操作步骤
1． 使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
2． 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空转移趋化生长因子β1孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3． 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
4． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
5． 每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
6． 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
7． 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
8． 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
9． 在450nm波长处测定各孔的OD值。
6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。
小鼠抗核抗体ELISA 检测试剂盒
试剂盒性能
1. 灵敏度：*小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990。
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%。
结 果 判 断 与 分 析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的ANA标准品浓度为横坐标（X），做得相应的曲线，样品的ANA含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度。
3、检测值范围：0-400IU/ml
4、敏感度： 1.0 IU/ml
C10 E9 10%溶液 [26183-52-81] 1g （10ml）
Butyl acetate 乙酸丁酯 [123-86-4] 250ml
tert-Butyl acrylate 丙烯酸叔丁酯 [1663-39-4] 250g
n-Butylamine 正丁胺 [109-73-9] 250ml
tert-Butylamine 叔丁胺 [75-64-9] 100ml
Butyl-4-aminobenzoate 4-氨基苯甲酸丁酯 [94-25-7] 250g
Butyl benzoate 苯甲酸丁酯 [136-60-7] 250ml
tert-Butyl bromide 溴代叔丁烷 [507-19-7] 250ml
4-tert-Butylcatechol 4-叔丁基邻苯二酚 [98-29-3] 50g
N-tert-Butyldimethylsilyl-N-methyltrifluoroacetamide N-特丁基二甲基硅-N-甲基三氟乙酰胺 [77377-52-7] 5ml
tert-Butylhydrazine hydrochloride 叔丁基肼盐酸盐 [7400-27-3] 500g
3-tert-Butyl-4-hydroxyanisole 叔丁基-4-羟基苯甲醚 [121-00-6] 50g
n-Butyl iodide 碘代正丁烷 [542-69-8] 100ml
4-tert-Butylphenol 4-叔丁基苯酚 [98-54-4] 250g
2-Furoic acid 糠酸 [88-14-2] 100g
G 418 sulfate G418 硫酸盐 [108321-42-2] 5g
Gallocyanine 花菁 [1562-85-2] 10g
2-（4-tert-Butylphenyl）-5-（4-biphenylyl）-1,3,4-oxadiazole 2-（4-叔丁基苯）-5-（4-联苯基）-1,3,4-恶二唑 [15082-28-7] 5g
Butyl vinyl ether 乙烯基正丁醚 [111-34-2] 250ml
n-Butyraldehyde 正丁醛 [123-72-8] 250ml
n-Butyric acid 正丁酸 [107-92-6] 250ml
C12 E8 10%溶液 [3055-98-9] 1g （10ml）
C12 E9 10%溶液 [3055-99-0] 1g （10ml）
C12 E10 10%溶液 [6540-99-4] 1g （10ml）
Caftaric acid 咖啡酸 [331-39-5] 25g
Calcein 钙黄绿素 [1461-15-0] 25g
Calcein, sodium salt 钙黄绿素二钠盐 [108750-13-6] 5g
Caffeic acid phenethyl ester 咖啡酸苯乙酯CAPE [104594-70-9] 5g
Glass beads, acid-washed 玻璃珠 / 50g
Calcitonin salmon 醋酸鲑鱼降钙素 [47931-85-1] 1mg
Calcium 钙 [7440-70-2] 250g
Calcium acetate, monohydrate 乙酸钙一水 [5743-26-0] 250g
Calcium carbonate, anhydrous 无水碳酸钙 [471-34-1] 500g
Calcium chloride, anhydrous 无水氯化钙 [10043-52-4] 500g
Calcium chloride, 1M sterile solution 1M 氯化钙溶液（无菌） / 100ml
Calconcarboxylic acid 钙指示剂 [3737-95-9] 10g
Calpain Inhibitor I 钙激活中性蛋白酶抑制剂 [110044-82-1] 5mg
Calpain Inhibitor II 钙激活中性蛋白酶抑制剂 [136632-32-1] 5mg
Calcium chloride, dihydrate 氯化钙 二水 [10035-04-8] 250g
Calcium citrate, tetrahydrate 柠檬酸钙 四水 [5785-44-4] 500g
Calcium floride 氟化钙 [7789-75-5] 500g
Calcium gluconate, hydrate 葡萄糖酸钙 [299-28-5] 100g
Calcium hydroxide 氢氧化钙 [1305-62-0] 500g
Calcium hypochlorite 次氯酸钙 [7778-54-3] 500g
Calcium hypophosphite 次亚磷酸钙 [7789-79-9] 250g
Calcium iodate, hexahydrate 碘酸钙六水 [7789-80-2] 50g
Calcium （L）-lactate, pentahydrate 乳酸钙五水 [5743-47-5] 100g
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