大鼠骨钙素（bgp）elisa试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。药品名称：通用名：大鼠骨钙素（bgp）酶联免疫分析试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆、或相关组织液中骨钙素（bgp）的含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中 大鼠骨钙素（bgp）水平。用纯化的大鼠骨钙素（bgp）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入骨钙素（bgp），再与hrp标记的骨钙素（bgp）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物tmb显色。tmb在hrp酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的骨钙素（bgp）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（od值），通过标准曲线计算样品中大鼠骨钙素（bgp）的含量。试剂盒组成 1 20倍浓缩洗涤液 30ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（1.35μg/l） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂a液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张; 6 显色剂b液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本处理及要求1．血清、血浆标本可直接测定；2．不能检测含nan3的样品，因nan3抑制辣根过氧化物酶的（hrp）活性。3．采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。操作步骤1.;;;;;;;; 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上按序设标准品孔10孔，在、第二孔中分别加标准品100μl，然后在、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；再各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后，在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉；再各取50μl分别加到第五、第六孔中；再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（ 稀释后各孔加样量都为50μl，浓 度分别为 9μg/l ，6μg/l ，3μg/l，1.5μg/l，0.75μg/l）。2.;;;;;;;; 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，轻轻晃动混匀。3.;;;;;;;; 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。;; 4.;;;;;;;; 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.;;;;;;;; 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.;;;;;;;; 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。7.;;;;;;;; 温育：操作同3。8.;;;;;;;; 洗涤：操作同5。9.;;;;;;;; 显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.;;;; 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11.;;;; 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（od值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。;计算;;以标准物的浓度为横坐标，od值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的od值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与od值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的od值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。注意事项1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4．;请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本od值大于标准品孔孔od值的），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请*后乘以总稀释倍数（×n×5）。5．;严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.6．本试剂不同批号组分不得混用。7．封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。8．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9．底物请避光保存。检测范围：0.5μg/l -10μg/l规格：96人份/盒保存条件及有效期1．试剂盒保存：；2-8℃。2．有效期：6个月

原创作者：旺森科技-007