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技术文章
选择凝胶的方法
点击次数:447 发布时间:2011/4/15 16:16:54
上海劲马生物科技有限公司专业经营生命科学领域的研究试剂、仪器和实验室消耗品,致力于向国内生命科学研究人员提供一流的产品和服务。
1.测定------分子量、PI
当目标蛋白的物理特性如分子量、PI等都不清楚时,可用PAGE电泳方法或层析方法加以测定。分离范围广阔的Superose HR预装柱很适合测定未知蛋白的分子量。用少量离子交换介质在多个含不同PH缓冲液的试管中,可简易地测出PI,并选择纯化用缓冲液的*佳PH。
2.选择------层析方法
若对目标蛋白的特性或样品成分不太了解,可尝试几种不同的纯化方法:
一] 使用*通用的凝胶过滤方法,选择分离范围广阔的介质如Superose、Sephacryl HR依据分子量将样品分成不同组份。
二] 用含专一配体或抗体的亲和层析介质结合目标蛋白。亦可用各种活化偶联介质偶联目标蛋白的底物、受体等自制亲和介质,再用以结合目标蛋白。一步即可得到高纯度样品。
三] 体积大的样品,往往使用离子交换层析加以浓缩及粗纯化。高盐洗脱的样品,可再用疏水层析纯化。疏水层析利用高盐吸附、低盐洗脱的原理,洗脱样品又可直接上离子交换等吸附性层析。两种方法常被交替使用于纯化流程中。
3.纯化------大量粗品
处理大量原液时,为避免堵塞柱子,一般使用sepharose big beads、sepharoseXL、sepharose fast flow等大颗粒离子交换介质。扩张柱床吸附技术利用多种STREAMLINE介质,直接从含破碎细胞或组织萃取物的发酵液中俘获蛋白。将离心、超滤、初纯化结合为一。提高回收率,缩短纯化周期。
上海劲马生物科技主营产品:ELISA试剂盒,检测试剂盒,分子生物学试剂盒,生物诊断试剂盒,金标检测试剂盒,放免试剂盒,生物试剂,胎牛血清,各类动物血清,各种抗体,实验仪器。
原创作者:杭州旺森科技有限公司