细胞凋亡
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详细内容
细胞凋亡(Apoptosis)是指为维持内环境稳定,由基因控制的细胞自主的有序的死亡。作为细胞的一种基本生物学现象,细胞凋亡是机体为更好地适应生存环境,而主动争取的一种死亡过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,一般过程包括4个阶段,即:诱导启动、细胞内调控、实施和凋亡细胞的吞噬搬运。细胞凋亡不仅是一种特殊的细胞死亡类型,而且具有重要的生物学意义及复杂的分子生物学机制。
细胞凋亡对胚胎发育及形态发生、组织内正常细胞群的稳定、机体的防御和免疫反应、疾病或中毒时引起的细胞损伤、老化、肿瘤的发生进展起着重要作用,并具有潜在的治疗意义,一直是生物医学研究的热点。
除了传统的凋亡细胞形态学检测,细胞凋亡的检测方法多种多样,且根据凋亡早期和晚期的样品,选择不同的检测手段。
检测细胞凋亡的方法有流式检测细胞凋亡(Annexin V/PI染色)和TUNNEL检测细胞凋亡。
磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)正常位于细胞膜的内侧,但在细胞凋亡的早期(或细胞损伤时),PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面,暴露在细胞外环境中。Annexin V是一种Ca2+依赖的磷脂结合蛋白,具有易于结合PS的特性,可充当敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的PS。碘化丙啶(Propidine Iodide, PI)是一种核酸染料,不能透过完整的细胞膜,但能够透过凋亡中晚期的细胞和死细胞的细胞膜,从而使细胞核染成红色。将Annexin V和PI一起使用,可以将凋亡早期、晚期的细胞以及死细胞区分开来。
实验流程
1、细胞收集
2、细胞洗涤
3、细胞标记
4、流式细胞仪分析
5、结果判断
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