（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤除去未结合的抗体及杂质，并用无关蛋白封闭空余结合位点。

（2）加受检标本使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

（3）加生物素标记抗体，使固相免疫复合物上的抗原与生物素标记抗体结合。彻底洗涤未结合的生物素标记抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

（4）加辣根过氧化物酶标记亲和素，使生物素标记抗体与辣根过氧化物酶标记的亲和素结合。彻底洗涤未结合的酶标记物。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。

（5）加入底物显色，即可计算标本浓度。

（6）注：一个抗体分子上可以标记上若干个生物素分子，一个生物素分子可以结合一个辣根过氧化物酶标记的亲和素，从而带来了大量的辣根过氧化物酶结合到抗体上，比传统的直接辣根过氧化物酶标记抗体具有更高的敏感性和放大效应。

【大鼠Cryα酶联免疫试剂盒检测原理】

本实验采用双抗体夹心ELISA法。所提供的ELISA Kit是典型的夹心法酶联免疫吸附测定试剂盒（ELISA）。预先包被的抗体为抗大鼠Cryα单克隆抗体。检测相抗体为多克隆抗体，经生物素（biotin）标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后，PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应；经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的待测因子呈正相关。试剂盒组成】

名称                             96 Tests    48 Tests    保存条件

1．大鼠Cryα抗体包被板条  8×12    8×64/-20℃

2．大鼠Cryα标准品 2 支（冻干）   1 支（冻干）4/-20℃

3．浓缩生物素化大鼠Cryα抗体 1支  1 支4/-20℃

4．浓缩酶结合物(ABC)  1支  1 支   4/-20℃

5. 酶结合物(ABC)稀释液           1支             1支               4/-20℃

6．抗体稀释液                    1瓶  1 瓶4/-20℃

7．标准品稀释液                  1瓶  1 瓶4/-20℃

8．样品稀释液　                  1瓶  1 瓶4/-20℃

9．浓缩洗涤液  1 瓶（25×） 1 瓶（25×）4/-20℃

10．显色剂A   1 瓶   1 瓶 (避光)4/-20℃

11．显色剂B   1 瓶            1 瓶        4/-20℃

12．终止液   1 瓶            1 瓶4/-20℃

13．说明书     1 份            1 份室温

【试验所需自备试验设备和器材】

1. 酶标仪(450nm检测波长滤光片，570nm或630nm校正波长滤光片) 。

2. 洗板机（可调注液量，保证每孔350μl洗液而不溢出）。

3. 超净工作台，生物安全柜，通风柜。

4. 高精度单道加液器（量程为0.5-10μl, 2-20μl,20-200μl,200-1000μl).

5. 高精度多道加液器（8道或12道，量程为50-300μl).

6. 37℃恒温箱。

7. 低温离心机。

8. 电冰箱（4℃,-20℃,-86℃）.

9. 分析天平。

10. 剪刀，镊子，钳子等。

11. 漩涡混合仪，低频振荡器等。