RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞描述

此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。

参数规格

1） 来源：鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞

2） 形态：不规则圆形，传代时密度要大，易分化

3） 含量：>1x106 个/mL

4） 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

储存方式

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式：

（1）干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏；

（2）存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

（3）收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

应用领域

仅供科研使用。                     

RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞接收后的处理：

1） 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2） 在显微镜下确认细胞生长状态时，在低倍镜（4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3） 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4） 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中（或新的培养瓶中）。

5） 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中（加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基）。

6）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后di一次传代建议1：2传代 。

操作流程

一．培养基及培养冻存条件准备：

1) 准备:DMEM (推荐iCell-0001) 培养基;优质胎牛血清 10%；添加Glutamax 1%；Sodium Pyruvate  1 %；P/S  1%

注意：DMEM基础培养基时要确认下培养基中谷氨酰胺、丙酮酸钠是否添加，如果没有添加，在培养细胞时技术人员要添加谷氨酰胺、丙酮酸钠。传代时密度要大，易分化。

2) 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入250px皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化10分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

4 . 收到细胞后首次传代推荐将细胞悬液按1：2的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中，建议客户冻存一支备用，后续传代根据实际情况按1:2到1:5的比例进行。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为类；

1，细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2，4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x10E6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

3，将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

公司介绍

赛百慷( 上海 )生物技术股份有限公司( iCell Bioscience Inc,Shanghai )是一家专注于研发生产高品质人体组织源及动物组织源原代细胞、细胞系、iPS细胞等产品，并提供专业技术服务外包的技术企业，公司总部位于上海。

赛百慷众多在国内国外细胞生物学领域里有着深厚造诣和丰富经验的高端专业技术人才，其中不乏的科学家及科学家团队，聚集全球原代细胞及iPS细胞领域的前沿技术研发，逐步形成我国首个开展广泛合作的细胞产业聚集地。赛百慷公司已经引进了生命科学领域的全套实验设备，建立了一流的生产研发实验室，采用了的行业技术标准、制造工艺、质检流程。

公司还积极多方引入资金，打造综合研发平台，力争率先引领中国iPS细胞的科研事业进程，已与国内外多家大学、科研院所、药企巨头建立了良好的合作关系。正是凭借独有的原代细胞领域原创技术的优势。

赛百慷（上海）生物技术股份有限公司主要产品和技术服务：

一、原代细胞服务

       各类模式哺乳动物的多种原代细胞资源；

       多种人源性正常及肿瘤原代细胞资源；

       原代细胞分离和培养相关试剂、kit、培养基添加剂等；

       原代细胞相关技术服务和整体实验外包服务；

二、细胞株/系服务

       细胞株/系培养、增殖、冻存和相关说明书；

       细胞系培养过程的技术指导；

       细胞系培养基、添加剂、血清及相关生长因子、试剂等；

三、iPS细胞

       iPS细胞基础培养（有滋养层or无滋养层在）；

       iPS细胞增殖及冷冻保存；

       iPS基础培养技术实习；

       新药及实验仪器上市前评估；

四、技术外包服务：各类细胞生物学实验、分子生物学实验、显微镜拍照服务等

五、其他：根据客户需要定制服务等
 

赛百慷（上海）生物技术股份有限公司

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