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牛孕酮(P4)ELISA试剂盒
点击次数：157发布时间：2019/7/8 14:17:59
更新日期：2020/3/27 10:51:39
所 在 地：中国大陆
产品型号：
优质供应
详细内容
牛孕酮(P4)elisa试剂盒基本信息：
产品货号：SBJ-B0065
产品规格：96（孔）/48（孔）
所属品牌：森贝伽
检测方法：酶免法/酶联免疫法(ELISA)
产品用途：仅供科研使用
保存条件：2-8℃
有效期：六个月
牛孕酮(P4)ELISA试剂盒样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
牛孕酮(P4)ELISA试剂盒操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为30 IU/L，20 IU/L ，10 IU/L，5 IU/L，2.5 IU/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品*终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
牛孕酮(P4)ELISA试剂盒检测过程中的常见问题还是很多的，下面所提到的是我司在检测过程中所遇到的一些ELISA产品会出现的问题及解决方法:
| 出现问题 | 问题的原因 | 解决办法 |
| 加入反应终止液后，没有吸光值或吸光值偏低 | 未加入酶标记物 | 请按照操作步骤进行 |
| 试剂盒内容物未能充分回 | 确定试剂盒内容物回温后再进行操作 | |
| 室温太低 | 若室温太低(<19℃)，适当延长温育时间 | |
| 未使用试剂盒的清洗液清洗 | 请用试剂盒内所提供的清洗液清洗 | |
| 试剂盒已过有效期限 | 请更换成仍在有效期限内的试剂盒 | |
| 标准曲线线性不佳，或是平行性不好 | 温育位置避光不好或受到气流干扰 | 请确认温育位置既不透光也不透风(如抽屉内) |
| 操作时间拖太久 | 请在方法熟练后再进行操作 | |
| 微孔间相互污染 | 加样品时，请小心勿溅出微孔外，以免造成其它微孔的污染 | |
| 标准品或酶标记物所加入的量不一致 | 请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性 | |
| 添加样品或试剂的操作方法不正确 | 加样品或试剂时，吸头请勿接触微孔 | |
| 洗板过程发生问题(如管路堵塞、洗完板后未立刻进行下一步骤) | 请随时监控洗板机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤 | |
| 吸光值均偏高(或线性不够陡) | 底物溶液受到污染 | 若发现底物溶液已呈现淡蓝色，请不要再使用 |
| 反应时间超过太久 | 请控制反应时间 | |
| 酶标记物污染了盒内其它试剂 | 使用过的吸头应立即丢弃，可避免试剂间相互污染，凡是试剂(特别是酶标记物与底物溶液)接触过的容器应立即清洗干净。(先以漂白水浸泡，再以清水冲洗干净，可确保无残留) | |
| 阴性标准品的吸光值低于阳性标准品的吸光值 | 微孔中的试剂未能充分混合 | 试剂加完后，需轻敲盘四周使其充分混合均匀 |
| 洗板过程发生问题 | 请随时监控洗板机洗板过程，洗完后立即进行下一步骤 | |
| 添加样品或酶标记物的量不一致 | 请使用已校正过的移液枪，并确保其与吸头之间有高度密合性 |
公司长期生产经营各种ELISA试剂盒包括人、大小鼠、豚鼠、兔、猪、犬、牛、羊、鸡、鸭、猴、植物等ELISA试剂盒并提供免费代测服务。如有需要欢迎来电咨询。
