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技术文章
海量PCR片段纯化试剂盒
点击次数：212 发布时间：2019/5/8 10:26:13
产品及特点
本试剂盒可用于海量PCR产物回收。在大规模制备PCR产物时（如DNA
Marker的制备），往往需要回收毫克级的PCR片段，如果使用传统的大提柱式法，
由于需要加3倍体积的上柱液，一次纯化实际处理量只有5-6 mL PCR反应液。此
外，由于需要多次（一般需要4-6次）洗脱才能将PCR片段全部从离心吸附柱上回
收，得到的PCR片段浓度很难控制（一般都较稀）。为解决上述问题，本公司特开
发出本产品，其流程如下：
它具有下列提点：
1. 海量处理。本试剂盒一次可以从40 mL的PCR反应液中纯化到毫克级的PCR片
段，是一般大提离心吸附柱的7-8倍（一次只能纯化6 mL）。
2. 快速。一次操作只需十分钟左右，时间是大提柱式法的1/3左右。
3. 回收的DNA高度浓缩，方便后续使用。由于得到的是DNA沉淀，可以溶解在
任何体积的溶液中，而柱式法需要反复洗脱才能得到全部DNA，很难控制*后
DNA的终浓度。
4. 回收效率高达90%，但片段长度不能低于100 bp。
5. 纯度高。回收的DNA可直接用于电泳、酶切、连接等多种分子生物学实验。
6. 非常容易放量或减量操作。因为是沉淀法，处理量由离心管的大小决定，
比使用离心吸附柱（处理量固定）更加方便。
使用及效果
在PCR反应产物中，加入0.1倍体积的溶液A，摇晃混匀后室温放置5分钟，
10000 g离心10分钟，弃上清，加入跟PCR溶液等体积的溶液B，摇晃混匀后
10000 g离心两分钟，所得沉淀即为回收的PCR片段，溶于适量溶液即可。
一次纯化800 μg PCR产物效果图
图注：左一为100 bp DNA Ladder。
左二是用本产品纯化25 mL PCR反应
液得到的长为250 bp的DNA产物，
DNA*后溶于2 mL TE中，DNA总量
为800 μg，此处上样量为5 μL。左三
是左二沉淀的上清用乙醇沉淀法回收
DNA后沉淀全部上样，没有DNA条带
说明本法沉淀回收DNA彻底。电泳染
料为本公司绿如蓝染料（实验编号：
304270）。
原创作者：福建盛嘉耐火材料有限公司
