1、细胞名称：Bend.3；小鼠脑微血管内皮细胞

 

2、生长特性：     贴壁   □ 悬浮   □半悬浮半贴壁

 

3、细胞生长条件：

培养条件   DMEM(高糖）+10%FBS+1%双抗

温度                               37℃

空气条件  5% CO2，,95% AIR

传代方法首次建议1:2传代，2~3天换液

冻存条件90%FBS+10%DMSO

 

4、背景资料：该细胞转染了NTKmT逆转录病毒载体，表达多瘤病毒中T抗原。血管性血友病因子的分泌和吸收荧光标记的低密度脂蛋白（LDL）证实了该细胞株的内皮细胞特性。细胞因子和脂多糖（LPS）可诱导细胞分泌MAdCAM-1和E选择素。TNF-α、IL-1和LPS的诱导是时间和浓度依赖。早代数的未刺激细胞会分泌MAdCAM-1和VCAM-1，但找过30代不分泌。细胞会组成型分泌ICAM-1，并且表达量会在LPS、IL-1和TNF-α刺激下增多。P选择素在早代数和晚代数细胞中受TNF-α诱导分泌，但30代后分泌量增加。

二．使用方法

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜完全培养液继续培养或进行传代。

 

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml完全培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，*后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞完全贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。 

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。