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技术文章
大鼠骨髓来源内皮祖细胞【CD34】免疫荧光鉴定报告
点击次数：388 发布时间：2019/5/30 10:40:51
大鼠骨髓来源内皮祖细胞【CD34】免疫荧光鉴定报告
一、实验器材及试剂
1、实验器材
载玻片及盖玻片 江苏世泰实验器材有限公司
显微镜 奥林巴斯 BX53 荧光显微镜
2、主要实验试剂
试剂 厂家 货号
多聚甲醛 国药集团 80096618
浓缩型正常山羊血清（封闭） 武汉博士德生物工程有限公司 AR1009
荧光（Cy3）标记羊抗兔 IgG 武汉博士德生物工程有限公司 BA1032
TritonX-100 碧云天 ST795
DAPI 碧云天 C1002
抗荧光淬灭封片剂 SouthernBiotech 0100-01
CD34（种属：兔） abcam ab81289
二、细胞爬片免疫荧光实验步骤
天：
1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3min；
2. 用 4%的多聚甲醛固定爬片 15min，PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3min；
3. 0.5% TritonX-100（PBS 配制）室温通透 20min；
4. PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3min，吸水纸吸干 PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室温
封闭 30min；
5. 吸水纸吸掉封闭液，不洗，每张玻片滴加足够量的稀释好的一抗（CD34）并放入湿盒，
4℃孵育过夜；
第二天：
6. 加荧光二抗：PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3min，吸水纸吸干爬片上多余液体后滴加稀释
好的荧光（Cy3）标记羊抗兔 IgG，湿盒中 20-37℃孵育 1h，PBST 浸洗切片 3 次，每
次 3min；注意：从加荧光二抗起，后面所有操作步骤都尽量在较暗处进行。
7. 复染核：滴加DAPI避光孵育5min，对标本进行染核，PBST 5min×4次洗去多余的DAPI；
8. 用吸水纸吸干爬片上的液体，用含抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在荧光显微镜下观
察采集图像。
一抗稀释比：
CD34（种属：兔） 1：100
荧光二抗稀释比：
荧光（Cy3）标记羊抗兔 IgG 1：100
三、实验结果：
1、CD34（200X）：图中红色荧光为 CD34 阳性，阳性率＞80%，即：细胞纯度＞80%
2、CD34（400X）：图中红色荧光为 CD34 阳性，阳性率＞80%，即：细胞纯度＞80%
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
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