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上海雅吉生物科技有限公司 主营产品:免疫组化试剂盒,ELISA试剂盒,抗体,细胞,对照品

当前位置:易推广>上海雅吉生物科技有限公司>技术文章>大豆球蛋白(Glycinin)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书

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技术文章

大豆球蛋白(Glycinin)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书

点击次数:25 发布时间:2024/12/13 8:52:21

 本试剂盒仅供研究使用。      
使用目的:
本试剂盒用于测定植物样本中大豆球蛋白(Glycinin)的含量。
实验原理
本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本大豆球蛋白(Glycinin水平。用纯化的大豆球蛋白(Glycinin抗体包被微孔板,制成固相体,往包被单抗的微孔中加入大豆球蛋白Glycinin),和HRP标记的大豆球蛋白(Glycinin)抗原,使它们竞争结合,,经过涤后加底物TMB显色。样本颜色的深浅和样品中的大豆球蛋白(Glycinin)的含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中大豆球蛋白(Glycinin)的含量。  
试剂盒组成

1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1

8
标准品S1160μg/ml 0.5ml×1
2 酶标试剂 6ml×1 标准品S280μg/ml 0.5ml×1
3 酶标包被板 12×8 标准品S340μg/ml 0.5ml×1
4 显色剂A 6ml×1 标准品S420μg/ml 0.5ml×1
5 显色剂B 6ml×1 标准品S510μg/ml 0.5ml×1  
6 终止液 6ml×1/ 9 说明书 1
7 样品稀释液 6ml×1/ 10 封板膜 2

标本要求 
1.标本处理:(1)水样   采集后经 -20℃反复冻融三次,再经玻璃纤维过滤后,备查
2)组织   样品用丁醇:甲醇:水(52570 V:V:V)抽提,或按相关文献提取进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,备查
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
操作步骤

  1. 加样:分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加50微升,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀
  2. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外
  3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育60分钟   
  4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30后弃去,如此重复5次,拍干。
  6. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.
  7. 终止:每孔加终止50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
  8. 测定:以空白孔调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值) 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算
  以标准物的浓度为横坐标,OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  1. 请每次测定的同时做标准曲线,复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时总稀释倍数(×n×5)。
  2. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
检测范围:
5 μg/ml -165 μg/ml
规格:
96人份/
保存条件及有效期
1试剂盒保存:2-8
2.有效期:6个月

原创作者:上海雅吉生物科技有限公司

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