通用名称：布鲁氏菌实时荧光PCR检测试剂盒

英文名称：Brucella Detection Kit (Real-Time PCR Method)

【包装规格】 25T/盒 & 50T/盒

【预期用途】

布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏菌（Brucella）引起的畜源性人畜共患传染病，在牛、羊、猪中常发生，患病家畜是人类布鲁氏菌病的主要传染源。近年来全国各地布鲁氏菌病疫情有上升的趋势，给畜牧业发展及人类身体健康带来极大的危害和威胁，造成巨大的经济损失和严重的公共卫生问题。本试剂盒利用实时荧光PCR原理，主要用于布鲁氏菌的定性筛查检测。

【检验原理】

本试剂盒针对布鲁氏菌基因设计特异性引物和分子信标探针，在待检样本中含有布鲁氏菌DNA的情况下，PCR反应得以进行并释放荧光信号。利用仪器对PCR过程中相应荧光信号进行实时监测和输出，实现检测结果的定性分析。

【主要组成成份】布鲁氏菌实时荧光PCR检测试剂盒

注：阴性对照为不含布鲁氏菌的其它菌的混合物，阳性对照为灭活的布鲁氏菌。

【储存条件及有效期】避光-20℃以下保存，避免反复冻融，有效期12个月。

【适用仪器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

【样本要求】

1. 如使用原始标本进行检测。标本（病人脑脊液、静脉血、关节液；病畜静脉血，乳汁；菌落，菌苔等）应为新鲜采集并使用双蒸灭菌水或灭菌生理盐水悬浮的原始标本。

2. 如需在增菌后进行PCR检测，则应使用选择性增菌液对原始标本进行增菌。

3. 标本收集后若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，标本应冻存于-20℃～-80℃。

【检验方法】

1. 试剂准备（试剂准备区）

（1）从冰箱中取出试剂盒, 从试剂盒中取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心以去除管壁附着液体。

（2）核算当次实验所需要的反应数（n），并根据如下表所示反应体系计算当次实验所需要的各种试剂量。

n =阴性对照数（1T）+阳性对照数（1T）+误差预留量（1T）+样本数

(3)在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心。按照20μL/管分装量将试剂分装至PCR反应管。

(4) 盖紧PCR反应管盖后将PCR反应管转移至样本处理区。剩余试剂放回-20℃以下冰箱冷冻保存。

2.样本准备（样本处理区）

用QIAGEN、Roche公司DNA提取试剂盒提取DNA，具体操作按照其试剂盒说明书操.

3.加样布鲁氏菌实时荧光PCR检测试剂盒

在上述制备好的PCR反应样本管中分别加入处理好的待测标本DNA各5 μl、终体积25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。阴性对照和阳性对照管则各加5 μL试剂盒自带的阴性对照或阳性对照品，终体积为25 μl/管，盖好PCR反应盖混匀后瞬时低速离心，转移到PCR仪器上。

4.PCR（PCR扩增区）

（1）取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽相应位置，并记录放置顺序。

（2）按下表设置仪器核酸扩增相关参数进行PCR扩增。