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转化生长因子β1/TGFβ1/TGF-β1抗体TGFβ1(Cleaved)免疫组化试剂盒
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详细内容
产品名称:转化生长因子β1/TGFβ1/TGF-β1抗体TGFβ1(Cleaved)免疫组化试剂盒
规格价格:以IHC工作液每个样品用量为100ul来计算,按照稀释比例1:400来计算,本试剂盒中一抗规格100ul可以检测400个样品以上。
保存条件:不使用时取试剂盒中一抗保存-20℃,其他均保存 2-8 ℃
试剂盒特点:利用LAB-SA第二代技术生产的免疫组化检测试剂,特点是高灵敏度,特异性强、定性定位准确、背景清晰等、低倍景染色,直接滴加,操作方便,孵育时间短,适用于冷冻切片、石蜡切片及固定的细胞涂片。可用于检测细胞、组织内的特异性抗原。
温馨提示:本检测试剂盒适用于人、大小鼠,兔等绝大多数组织,但对于内源性生物素含量比较丰富的组织(如肾脏、肝脏等),应选用非生物素检测系统,或用avdin 封闭。
产品特点
转化生长因子β1/TGFβ1/TGF-β1抗体TGFβ1(Cleaved)免疫组化试剂盒含试剂:
1、一抗(应用:IHC-P=1:400-800 IHC-F=1:400-800 )
2、无色试剂:内源性过氧化物酶阻断剂
3、试剂A:封闭用正常山羊血清工作液
4、试剂B:生物素标记二抗工作液:生物素标记羊抗兔IgG
5、试剂C:辣根酶标记链酶卵白素工作液
6、显色液D液 (棕色) 1ml
7、显色液E液(白色)20ml
产品相册
用户自备试剂(用户自行购买,亦可咨询我公司客服购买):
一、0.1M PBS (pH7.2-7.4)缓冲液:
PBS(phosphate buffered solution)即磷酸盐缓冲液,能够提供相对稳定的离子环境和pH缓冲能力,是生物学中经常使用的缓冲盐溶液,用于分子克隆及细胞培养等,pH为7.2-7.4,与人体血液等渗,主要成分为磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠以。
二、柠檬酸钠抗原修复液:
可以用于石蜡切片、冰冻切片等样品使用多聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。可以有效去除醛类固定试剂导致的蛋白之间的交联,充分暴露石蜡切片等样品中的抗原表位,从而大大改善免疫染色效果。
抗原修复方法:
方法1:沸水浴修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于沸水浴环境,保持外部沸腾状态15min,自然冷却至室温。
方法2:微波修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于微波炉中,高火5min,停火3min,中火5min,自然冷却至室温。
方法3:高压修复,将盛有修复液和玻片的烧杯置于高压锅,上汽后修复2-5min,然后将高压锅置入凉水中,减压至正常后取出玻片
抗原修复注意事项:
1)脱蜡水化的切片,应避免因切片干燥,而至非特异性染色。
2)热修复操作时务必谨慎,当心烫伤。
3)热修复时间过长易导致脱片,请注意控制时间。
三、DAB(二氨基联苯胺)染色液:
过氧化物酶将使底物发生反应,于反应部位产生棕色沉淀物。标本显色时间一般为室温 5~20分钟,请在显微镜下观察显色况,显色充分后应将标本及时脱水封固。
转化生长因子β1/TGFβ1/TGF-β1抗体TGFβ1(Cleaved)免疫组化试剂盒实验前准备:
安装步骤与维护一)一抗稀释的准备:
方法1. 实验前,将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释(或PBS稀释),将稀释后的抗体分装5-10支(20ulx5支或10ulx10支),放入-20℃保存,用一支拿一支,避免反复冻溶。
方法2. 实验前,也可将冻干粉抗体用无菌蒸馏水稀释50ul(或PBS稀释50ul)成原液:再加50%甘油, 放入-20℃保存,用多少吸多少。
方法3. 预试验可做几个梯度1:100、200、400背景高还可做上去,选一个适合的稀释比例,再正式做。工作液的稀释-使用抗体稀释液。
二)DAB显色液的制备实验准备:在1毫升试剂E(DAB 底物液)中,加入1滴(约50微升)试剂D(DAB浓缩液),混合均匀,即配成DAB工作液。此溶液必须现用现配,配好后避光保存,6小时内使用,剩余的液体应弃去。标本显色时间一般为室温 5~20分钟,请在显微镜下观察显色的情况,显色充分后应将标本及时脱水封固。
转化生长因子β1/TGFβ1/TGF-β1抗体TGFβ1(Cleaved)免疫组化试剂盒实验步骤(建议方案):
1、石蜡切片,常规脱蜡至水
2、蒸馏水冲洗,pbs 浸泡5 分钟(如需采用抗原修复,在此步骤后进行)。
3、3%双氧水去离子水(无色液体)孵育15-20 分钟,以消除内源性过氧物酶活性。
4、滴加试剂A(蓝色液体)室温孵育15-20 分钟,倾去,勿洗。
5、滴加适当比例稀释的一抗,37℃孵育2-3 小时或4℃过夜。
6、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
7、滴加试剂B(黄色液体),室温或37℃孵育15-20 分钟。
8、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
9、滴加试剂C(橙色液体),室温或37℃孵育15-20 分钟。
10、PBS 冲洗,3 分钟3 次。
11、显色剂显色(DAB 或AEC)
12、自来水充分冲洗。
13、如果需要,可进行复染,脱水,透明。
14、选择适当的封片剂封片。
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