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即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)
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品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号： 原产地：中国大陆 发布时间：2019/5/6 8:38:18更新时间：2024/10/18 11:33:40
产品摘要：即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)是可以用于LAMP等温扩增，LAMP即Loop-Mediated Isothermal Amplification（环介导等温扩增），是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA 聚合酶，在等温条件下（63℃左右）30-60分钟完成扩增
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详细内容
产品特点
即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)是基于 Feinberg 和 Vogelstein 发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA 探针标记试剂盒，标记过程由双链 DNA 热变性、随机引物与单链 DNA 结合、在Klenow DNA 聚合酶催化下，引物的延伸合成 DNA 探针并掺入标记的核苷酸三步组成，
即用型蓝白 T 载体 A 型 (T7-SP6，有 MCS)是基于 Feinberg 和 Vogelstein 发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA 探针标记试剂盒，标记过程由双链 DNA 热变性、随机引物与单链 DNA 结合、在Klenow DNA 聚合酶催化下，引物的延伸合成 DNA 探针并掺入标记的核苷酸三步组成，
可用下面的示意图表示：
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分，简化了反应加样步骤，提高了
标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的 Klenow exo- DNA 聚合酶，已标记 DNA 探针不会被酶降解。
3. 快速，*快 1 小时即可完成标记反应。
4. 得到的 DNA 探针比活性高（如果是同位素，可以达到 109cpm/ug DNA）。
5. 所需模版 DNA 量少，可以是各种形状（线状和环状）的、也可以是单链或双链的，
但长度必须在 100 bp 以上。
6. 得到的探针长度在 200-400 nt 之间，可以用于 Southern 杂交、Northern 杂交、
原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择，其中 90603A 可用于各种同位素和非同位素标记，但需自备标
记底物；90603B 和 90603C 可分别用于生物素和标记，不需自备标记底物。
规格及成分 A 型
成 份 编 号 十孔盒包装
2×随机引物标记反应液(A 型) 90603a 50 uL
dATP，2 mM 90603d1 10 uL
dTTP，2 mM 90603d2 10 uL
dGTP，2 mM 90603d3 10 uL
dCTP，2 mM 90603d4 10 uL
Klenow exo-聚合酶，2U/uL 90603e 5 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 90603sc 1 份
B 型（生物素标记）
成 份 编 号 十孔盒包装包装
2×随机引物标记反应液(B 型) 90603b 50 uL
Klenow exo-聚合酶，2U/uL 90603e 5 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 90603sc 1 份
C 型（DIG 标记）
成 份 编 号 十孔盒包装包装
2×随机引物标记反应液(C 型) 90603c 50 uL
Klenow exo-聚合酶，2U/uL 90603e 5 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 90603sc 1 份
运输及保存 低温运输，-20℃保存，有效期一年。
自备试剂 0.5M EDTA（pH8.0）。如果是 A 型，则需要自备标记的核苷酸。
使用方法 1. 在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分：
成分 用量
模板 DNA 50-150 ng
2×随机引物标记反应液(ABC 三种) 10 uL
超纯水 补水到 15 uL
注意：非同位素标记基团疏水性强，易与塑料离心管表面非特异性结合，所以要硅化
塑料离心管。模板 DNA 并非越多越好，否则会竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴 5-10 分钟，或在 PCR 仪上 100℃加热 5-10 分钟后立即放冰上待用。
3. 高速离心数秒使所有液体集中在管底，根据试剂盒类型加入下列成份：
试剂盒类型 成分及用量
A 型 dATP、dGTP、dCTP 各 1 uL（共 3uL，浓度均为 2mM）
自备的 2mM dTTP/标记 dUTP 混合物（见注）1uL
1 uL Klenow exo 聚合酶
B 型 1 uL Klenow exo 聚合酶
4 uL 超纯水
不需加 dNTP，已经包括在 2×随机引物标记反应液（B 型）中
C 型 1 uL Klenow exo 聚合酶
4 uL 超纯水
不需加 dNTP，已经包括在 2×随机引物标记反应液（C 型）中
注：上表中的 dTTP/标记 dUTP 混合物中 dTTP 和标记的 dUTP 的总浓度为 2mM，
dTTP 与标记 dUTP 的比例在 65：35 为*佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸，
如 fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin 和 aminoallyl 标记的 dUTP，则
用户需要自己摸索其与 dTTP 之间的*佳比例，如果使用 32P 标记的 dUTP，则比
活为 3000Ci/mmol，浓度为好为 10uCi/uL，并且不需要加入 dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上，高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温 1-20 小时。标记效率跟模板量和保温时间相关，具体见下表：
模版 DNA 用量
（ng）
1 小时后探针合成量
（ng）
20 小时后探针合成量
（ng）
10 80 900
30 150 1350
100 350 1650
300 750 2200
1000 1300 2600
3000 1600 2600
6. 加 1 uL 自备的 0.5M EDTA（pH 8.0）终止反应，加热 100℃ 5 分钟使 DNA 探
针变性成单链，然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测，标记产物将是
弥散状态。立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要
注意：本方法标记核苷酸掺入率极高，因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化，
注意不要用酚抽提法纯化非同位素标记的 DNA 探针，因为这些标记分子疏水性强，
能使标记的 DNA 进入疏水的有机相而丢失，但可以用乙醇沉淀和 Sephadex G50
回收（可另购柱式探针纯化试剂盒，产品编号 121122）。对比活高的同位素标记探
针，由于同位素其极其不稳定，因此应该立即使用，不要长久放置。
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