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上海雅吉生物科技有限公司 主营产品:免疫组化试剂盒,ELISA试剂盒,抗体,细胞,对照品

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可保种型蓝白 T 载体

价格:¥电议

品牌名称:$brandModel.Title(进口品牌)型号: 原产地:中国大陆 发布时间:2019/5/6 8:38:48更新时间:2024/10/18 11:33:40

产品摘要:可保种型蓝白 T 载体是可以用于LAMP等温扩增,LAMP即Loop-Mediated Isothermal Amplification(环介导等温扩增),是2000年才出现的一种新颖的等温核酸扩增方法。它利用4条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA 聚合酶,在等温条件下(63℃左右)30-60分钟完成扩增

产品完善度: 访问次数:370

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手机网站:http://m.yituig.com/c141887/

商铺地址:http://www.yajimall.com

详细内容

   产品特点
可保种型蓝白 T 载体是基于 Feinberg 和 Vogelstein 发明的随机引物标记法而开发出来的即用型DNA 探针标记试剂盒,标记过程由双链 DNA 热变性、随机引物与单链 DNA 结合、在Klenow DNA 聚合酶催化下,引物的延伸合成 DNA 探针并掺入标记的核苷酸三步组成,
可用下面的示意图表示:
应用领域
可保种型蓝白 T 载体对 Feinberg 和 Vogelstein 经典方法进行了改良,具有下列特点:
1. 提供的标记反应液整合了除酶和模板外的所有成分,简化了反应加样步骤,提高了
标记反应的可重复性。
2. 使用无外切活性的 Klenow exo- DNA 聚合酶,已标记 DNA 探针不会被酶降解。
3. 快速,*快 1 小时即可完成标记反应。
4. 得到的 DNA 探针比活性高(如果是同位素,可以达到 109cpm/ug DNA)。
5. 所需模版 DNA 量少,可以是各种形状(线状和环状)的、也可以是单链或双链的,
但长度必须在 100 bp 以上。
6. 得到的探针长度在 200-400 nt 之间,可以用于 Southern 杂交、Northern 杂交、
原位杂交、菌落和斑点印迹杂交等。
7. 提供三种标记选择,其中 90603A 可用于各种同位素和非同位素标记,但需自备标
记底物;90603B 和 90603C 可分别用于生物素和标记,不需自备标记底物。
规格及成分 A 型
成 份 编 号 十孔盒包装
2×随机引物标记反应液(A 型) 90603a 50 uL
dATP,2 mM 90603d1 10 uL
dTTP,2 mM 90603d2 10 uL
dGTP,2 mM 90603d3 10 uL
dCTP,2 mM 90603d4 10 uL
Klenow exo-聚合酶,2U/uL 90603e 5 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 90603sc 1 份
B 型(生物素标记)
成 份 编 号 十孔盒包装包装
2×随机引物标记反应液(B 型) 90603b 50 uL
Klenow exo-聚合酶,2U/uL 90603e 5 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 90603sc 1 份
C 型(DIG 标记)
成 份 编 号 十孔盒包装包装
2×随机引物标记反应液(C 型) 90603c 50 uL
Klenow exo-聚合酶,2U/uL 90603e 5 uL
超纯水 100935 1 mL
使用手册 90603sc 1 份
运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。
自备试剂 0.5M EDTA(pH8.0)。如果是 A 型,则需要自备标记的核苷酸。
使用方法 1. 在一干净的硅化的塑料离心管中加入下列成分:
成分 用量
模板 DNA 50-150 ng
2×随机引物标记反应液(ABC 三种) 10 uL
超纯水 补水到 15 uL
注意:非同位素标记基团疏水性强,易与塑料离心管表面非特异性结合,所以要硅化
塑料离心管。模板 DNA 并非越多越好,否则会竞争性地抑制探针跟靶分子的杂交。
2. 沸水浴 5-10 分钟,或在 PCR 仪上 100℃加热 5-10 分钟后立即放冰上待用。
3. 高速离心数秒使所有液体集中在管底,根据试剂盒类型加入下列成份:
试剂盒类型 成分及用量
A 型 dATP、dGTP、dCTP 各 1 uL(共 3uL,浓度均为 2mM)
自备的 2mM dTTP/标记 dUTP 混合物(见注)1uL
1 uL Klenow exo 聚合酶
B 型 1 uL Klenow exo 聚合酶
4 uL 超纯水
不需加 dNTP,已经包括在 2×随机引物标记反应液(B 型)中
C 型 1 uL Klenow exo 聚合酶
4 uL 超纯水
不需加 dNTP,已经包括在 2×随机引物标记反应液(C 型)中
注:上表中的 dTTP/标记 dUTP 混合物中 dTTP 和标记的 dUTP 的总浓度为 2mM,
dTTP 与标记 dUTP 的比例在 65:35 为*佳。但如果使用自备的其他标记核苷酸,
如 fluorescein、hydroxycoumarin、resorufin 和 aminoallyl 标记的 dUTP,则
用户需要自己摸索其与 dTTP 之间的*佳比例,如果使用 32P 标记的 dUTP,则比
活为 3000Ci/mmol,浓度为好为 10uCi/uL,并且不需要加入 dTTP。
4. 轻柔吹打混匀。如有液滴沾在管壁上,高速离心数秒使所有液体集中在管底。
5. 37℃保温 1-20 小时。标记效率跟模板量和保温时间相关,具体见下表:
模版 DNA 用量
(ng)
1 小时后探针合成量
(ng)
20 小时后探针合成量
(ng)
10 80 900
30 150 1350
100 350 1650
300 750 2200
1000 1300 2600
3000 1600 2600
6. 加 1 uL 自备的 0.5M EDTA(pH 8.0)终止反应,加热 100℃ 5 分钟使 DNA 探
针变性成单链,然后直接加入到杂交反应液中即可。如果电泳检测,标记产物将是
弥散状态。立即放冰上待用或放-20℃保存一年。用前需要
注意:本方法标记核苷酸掺入率极高,因此可以不经纯化直接使用。如果需要纯化,
注意不要用酚抽提法纯化非同位素标记的 DNA 探针,因为这些标记分子疏水性强,
能使标记的 DNA 进入疏水的有机相而丢失,但可以用乙醇沉淀和 Sephadex G50
回收(可另购柱式探针纯化试剂盒,产品编号 121122)。对比活高的同位素标记探
针,由于同位素其极其不稳定,因此应该立即使用,不要长久放置。
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海量PCR 片段纯化试剂盒
96 孔板PCR 片段纯化回收试剂盒( 离心法)
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96 孔板PCR 片段纯化回收试剂盒( 真空法)
0.5mL DNA 离心超滤管(9-15 KD)
0.5mL DNA 离心超滤管(30-50 KD)
0.5mL DNA 离心超滤管(90-150 KD)
0.5mL DNA 离心超滤管(150-250 KD)
0.5mLDNA 离心超滤管(300-500 KD)
4mL DNA 离心超滤管(9-15 KD)
4mL DNA 离心超滤管(30-50 KD)
4mL DNA 离心超滤管(90-150 KD)
4mL DNA 离心超滤管(150-250 KD)
4mL DNA 离心超滤管(300-500 KD)
15mL DNA 离心超滤管(9-15 KD)
15mL DNA 离心超滤管(30-50 KD)
15mL DNA 离心超滤管(90-150 KD)
15mL DNA 离心超滤管(150-250 KD)
柱式DNA 胶回收试剂盒
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胶回收及PCR 片段纯化两用试剂盒
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一管式DNA 胶回收试剂盒
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DNA UV 防护剂
DNA PAGE 胶回收试剂盒
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柱式DNA PAGE 胶回收试剂盒
柱式OLIGO 回收试剂盒
miRNA PAGE 胶回收试剂盒
柱式miRNA PAGE 胶回收试剂盒
琼脂糖
低熔点琼脂糖
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电泳级丙烯酰胺溶液( 干粉型)
电泳级甲叉双丙烯酰胺
电泳级TEMED
电泳级过硫酸铵
电泳级尿素
电泳级MOPS
剥离硅烷
亲和硅烷
电泳级甘油
电泳级二甲苯蓝FF 溶液,1%
电泳级溴酚蓝溶液
电泳级橙黄G 溶液
PAGE 胶长加样枪头
水饱和正丁醇
预混型丙烯酰胺- 甲叉双丙烯干粉(19:1)
预混型丙烯酰胺- 甲叉双丙烯干粉(29:1)
随机引物法DNA 探针标记试剂盒
随机引物法DNA 探针生物素标记试剂盒
 
填入法DNA 末端标记试剂盒A
填入法DNA 末端标记试剂盒B
填入法DNA 末端标记试剂盒C
DNA 5’末端标记试剂盒
dNTP 溶液( 标记专用)
生物素标记dUTP 溶液
 

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