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PC-9人肺癌细胞
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品牌名称：$brandModel.Title(进口品牌)型号： 原产地：中国大陆 发布时间：2019/6/4 8:37:48更新时间：2024/10/18 11:33:40
产品摘要：PC-9人肺癌细胞细胞超微结构特征包括众多微绒毛、显著的粗面内质网、溶酶体、脂包含体、无病毒颗粒；此外，Calu-1细胞含ras(H-ras)癌基因。
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详细内容
产品特点
别称VERO; Verda reno
种属猴
年龄（性别）成年
组织来源正常肾
生长特性贴壁细胞
细胞形态上皮细胞样
背景描述PC-9人肺癌细胞是由日本千叶大学的Y·Yasumura和Y·Kawakita从正常成年非洲绿猴的肾脏建株的。1964年6月15日，B·Simizu将Vero细胞从千叶大学带到国立健康研究所(NIH)国立过敏及传染病研究所热带病毒实验室时，已传至第93代。
生物安全等级1
生长培养基MEM(PM150410)＋10% FBS(164210-500)＋1% P/S(PB180120)
推荐传代比例1:3-1:4
推荐换液频率2-3天/次
冻存条件
冻存液：50%基础培养基+40%胎牛血清+10%DMSO
温度：液氮
培养条件
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
保藏机构ATCC; CCL-81 ATCC; CCL-81.4 ATCC; CRL-6318 ECACC; 08011101 ECACC; 84113001
主要优点
STR鉴定简介：
STR鉴定简介：
PC-9人肺癌细胞通过STR鉴定应用于生物医学研究领域的哺乳动物细胞被错误鉴定和交叉污染的问题，一直是一个普遍存在的突出问题。
据统计，国外实验室有20%左右的细胞株被错误鉴定和交叉污染，NIH和ATCC近两年都对此发出呼吁，要求研究者对细胞进行鉴定。近年来，大量研究表明STR基因分型方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的*有效和准确的方法，STR基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐。美国的ATCC细胞库、德国的DSMZ细胞库以及日本的JCRB细胞库等为STR分型提供了各细胞株的数据供比对。
STR（Short Tandem Repeat，短串联重复序列）基因位点由长度为3-7个碱基对的短串连重复序列组成，这些重复序列广泛存在于人类基因组中，可作为高度多态性标记，被称为细胞的DNA指纹，其可通过PCR（聚合酶链式反应）来检测。STR基因座位上的等位基因可通过扩增区域内重复序列的拷贝数的不同来区分，在毛细管电泳分离之后可通过荧光检测来识别。随后通过一定的计算方法，即可根据所得的STR分型结果与专业的细胞STR数据库比对从而推算出样品所属的细胞系或可能的交叉污染的细胞系名称。
工作原理
实验材料孕鼠
工作原理
实验材料孕鼠
试剂、试剂盒PBSEDTA胰酶MEF生长培养基FBS高糖DMEM
仪器、耗材眼科直剪眼科直镊眼科弯镊玻璃平皿3尼龙滤网离心管手术刀片
实验步骤
一、实验材料准备
1. 动物
孕期14至16天的孕鼠(小鼠)。
2. 试剂
无Ca2+和Mg2+的PBS(D-PBS)、0.05%胰酶、0.53 mmol/L EDTA溶液、MEF生长培养基(高糖DMEM加10%FBS)。
3. 器械
眼科直剪3把、眼科直镊3把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套、200目尼龙滤网、50 ml和15 ml离心管和手术刀片。以上物品均需要高压灭菌消毒处理。
二、PC-9人肺癌细胞具体操作
1. 处死孕鼠，全身置于75%酒精里浸泡，然后在超净台中用剪刀和镊子将孕鼠皮肤剪开，用另外一组剪刀、镊子剪开腹部肌层，露出子宫，*后用第三组剪刀和镊子将子宫小心取出放在盛有D-PBS的玻璃平皿中，冲洗去血。
2. 用两把弯镊子将胚胎外的胞膜小心去除，然后夹掉头和内脏，将其余胚胎转移到一个装有30 ml D-PBS的50 ml离心管中，轻轻颠倒两次，倒掉D-PBS，再重复此步骤一次，注意要留少许D-PBS，然后将胚胎转移到另一装有D-PBS的平皿中，并用手术刀片将其细细切碎。
3. 用200 ul的移液枪反复、快速地吹打平皿中的液体，转移至15 ml离心管中，于4℃ 1500 rpm离心5分钟，倒掉上清，以10 ml胰酶重悬沉淀，放在37℃水浴中消化30分钟，且每隔五分钟轻轻晃动，使之充分消化。
4. 将上层细胞悬液倒入一个装有10 ml MEF生长培养基的50 ml离心管中，用200目的尼龙网过滤后，以1 500 rpm离心5分钟收集细胞，再用30 ml MEF生长培养基洗涤两次。
5. 细胞沉淀用15 ml MEF生长培养基重悬后进行细胞计数(一般8只14天的胎鼠可获得2-3x107细胞)。
6. 3x106细胞悬浮于15 ml MEF生长培养基中，接种到200 ml培养瓶中。
7. 24小时后更换新鲜的MEF生长培养基。
8. 细胞长满后，先用D-PBS冲洗，倒掉后加胰酶消化(此步时间不宜过长，作者一般不超过五分钟)，按1:5传代。
9. 细胞再次长到覆盖率80-90%左右，将其消化后，常规冻存(冻存液要现配)。
(MEF 100倍)
收起
注意事项
1. 原代培养，一定要避免污染。
2. MEF生存能力有限，如果不冻存，体外存活十代左右。
3. 冻存后复苏的细胞只能传代一次，因为这些细胞繁殖能力有限。
4. 消化细胞时间不要过长。
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