言：丙po酚是一种镇静性催眠麻醉剂，常用于诱导全身麻醉。诱导麻醉的典型剂量约为2-2.5 mg/kg，而维持麻醉则需要约 0.2 mg/kg/h 的输注。本应用简报描述了血清、全血、玻璃体液、尿液或组织匀浆的分析方法。分析中样品的少需要量为 1.0 mL。将生物样品碱化至碱性 pH 值，用庚烷萃取，然后对丙po酚进行分离。

实验部分标准品和试剂试剂 — 庚烷和氢氧化铵 — 试剂。标准品 — 丙po酚 (P-076 1 mg/mL) 和丙po酚 d-17(P-077 100 mcg/mL) 内标物购自Cerilliant。丙po酚储备 QC 标准品 — (1 g - MP Biomedical) 用于制备溶于甲醇的 1 mg/mL 的工作 QC 标准品。碳酸钠/碳酸氢钠缓冲液 — pH = 9.8（将 100 g 碳酸钠和 50 g 碳酸氢钠混合于 1000 mL 去离子水中。通过逐滴加入 5 N 的 NaOH或 10% 磷酸将 pH 调至 9.8）。随后制备工作标准品：丙po酚 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇将 0.1 mL 的 Cerilliant储备液稀释至 10 mL）。丙po酚 d-17 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇将 1.0 mL 的Cerilliant 储备液稀释至 10 mL）。丙po酚工作 QC 标准品 — 10 µg/mL（在容量瓶中用甲醇将 0.1 mL的 MP Biomedical 工作 QC 储备液稀释至 10 mL）。在 2-8 ºC 下储存所有标准品，稳定期为 2 年。对照和校准标准品阴性对照 — 来自美国红十字会的不含药的全血，使用生理盐水(0.9%) 按 1:2 稀释，储存于 -20 ºC 下，可稳定 1 年。低对照 — (0.25 µg/mL) 在 16 × 100 mm 螺口盖培养管内将 25 µL工作丙po酚 QC 标准品 (10 µg/mL) 加至 975 µL 的空白血液中。高对照 1 — (0.75 µg/mL) 在 16 × 100 mm 螺口盖培养管内将 75 µL工作丙po酚 QC 标准品 (10 µg/mL) 加至 925 µL 的空白血液中。高对照 2—(1.5 µg/mL）在 16 × 100mm螺口盖培养管内将 150 µL工作丙po酚 QC 标准品 (10 µg/mL) 加至 850 µL 的空白血液中。

样品制备1. 使用如下在 16 × 100 mm 培养管中的工作标准品和不含药的血液制作校准曲线：• 0.1 µg/mL-10 µL 标准品和 990 µL 血液• 0.2 µg/mL-20 µL 标准品和 980 µL 血液• 0.5 µg/mL-50 µL 标准品和 950 µL 血液• 1.0 µg/mL-100 µL 标准品和 900 µL 血液• 2.0 µg/mL-200 µL 标准品和 800 µL 血液2. 将 1 mL 样品、阴性和阳性对照移取到带标记的 16 × 100 mm螺口盖培养管内。3. 向各管内加入 100 µL 工作内标物。4. 加入 2 mL pH 11.0 的缓冲液。加入 0.5 mL 庚烷。5. 加盖，涡旋（约 15 s）。6. 旋转 15 min，然后在 3,000 rpm 下离心至少 10 min。7. 将约 200 µL 的庚烷层转移入具有 300 µL 内插管的 ALS 瓶内。8. 压合瓶盖，转至气相质谱进行分析。

结果与讨论下列标准用于确定丙po酚是否存在以及其含量。• 色谱分析结果可被接受（峰分辨率、峰对称性、不存在交叉污染）。• 存在可用来定量和定性的选择性离子。• 离子比例处于校准确定的靶标值的 20% 以内。• 来自测试标本的假定丙po酚的保留时间大约在近一次校准保留时间的± 2% 以内。

方法限使用丙po酚和内标物定量离子的面积进行定量分析。通过比较未知物和对照物的相对响应，并比较各校准物浓度的相对响应而产生的校准曲线来实现定量。阳性对照必须处于其靶标范围内，阴性对照中不能有丙po酚的存在。线性 0.1–2.0 µg/mL检测限 (LOD) 0.05 µg/mL定量限 (LOQ) 0.10 µg/mL交叉污染 在 2.0 µg/mL 的浓度测量值后未见交叉污染干扰物 未发现

结论本应用简报展示了一种使用丙po酚 d-17 作为内标物测定生物样品中丙po酚的灵敏且稳定的选择性方法。对于丙po酚的分析，气相色谱四杆离子阱串联质谱的优势不可低估。气相色谱四杆离阱串联质谱在减少样品基质干扰、改善信噪比以及兼具高选择性和灵敏性方面，为丙po酚的分析提供了可信度更高的解决方案。气相色谱四杆离子阱串联质谱分析能够减少假阳性和假阴性，还能在所得的结果中实现更高的可信度。使用上文所列的优化方法，可将快速、靶向的气相色谱-串联质谱方法用于解决当法医实验室所面临的丙po酚分析难题。联合使用三种阳性对照与阴性对照可确保在未知生物样品中进行精确定量并排除假阴性。在多种样品基质中均观察到了低至µg/mL 的检测限。

原创作者：上海斯迈欧分析仪器有限公司