在固相萃取技术中应用 Agilent SampliQ 优化聚合物技术（OPT）吸附剂，可以进行市售金印草生物碱（黄连碱和小檗碱）样品的净化。这些生物碱的分离是以 0.1%磷酸/甲醇溶液为流动相，在 Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 色谱柱(4.6 mm × 75 mm × 3.5 µm)上，采用配备二管阵列检测器（DAD）的 Agilent 1200 系列液相色谱仪进行。梯度洗脱时的总分析时间仅为 6 分钟。黄连碱的回收率范围在 101%到 106%(n=8)指尖，而小檗碱的回收率范围则在 71%到 82%(n=8)之间，且 RSD%均小于 1。黄连碱的检测限和定量限分别为 0.50 和 1.65 µg/mL，而小檗碱的检测限和定量限则分别为 0.47 和1.55 µg/mL。来自 Willow 的金印草样品含有 17 µg/mL 黄连碱和 35 µg/mL 小檗碱，而来自 Solga 金印草样品含有 6 µg/mL 黄连碱和 12 µg/mL 小檗碱。

言金印草（北美黄连）是多年生毛茛科草本植物，原产于东南部和美国东北部，是一种古老的草药植物，也是传统中药中常用的药用植物。金印草的生物活性与异喹啉生物碱黄连碱和小檗碱（结构见图 1）有关，金印草中还含有其它生物碱，包括白毛莨分碱、四氢小檗碱和氢化小蘖碱[2]。金印草已经用于感染、炎症的治疗和免疫系统增强剂[3]。然而，由于规范草药和保健品行业的新规章和新法律的紧迫性，建立包括样品制备、净化和预浓缩的样品处理方法在内的普遍适用和高灵敏度分析方法的需求正在增加。样品处理是分析过程中基本的步骤，因为它有利于达到由监管部门所设定的低检测限要求[4]。固相萃取技术（SPE）是目常用的净化技术，常用于液相色谱（HPLC）或气相色谱（GC）进行环境、食品、制药和生物样品分析之的样品处理。与传统的液-液萃取相比，固相萃取具有很多优势，如有机溶剂使用量小、易于自动化、更低的成本及有毒物残留量等。近年来，有关新型固相萃取材料的发展已有诸多报道，如混合模式吸附剂和限制进入型吸附剂、免疫亲和萃取吸附剂、分子印迹聚合物、导电聚合物[6,7,8]。本应用报告报道了一种采用 Agilent SampliQ 优化聚合物技术(OPT)固相萃取柱，进行金印草中黄连碱和小檗碱固相萃取的优化方法，该方法采用了聚合物基吸附剂，大大减少了基体干扰，改善了分析结果。

实验部分试剂和化学药品盐酸小檗碱和盐酸黄连碱标准物购自 Sigma- Aldrich 公司（美国）。磷酸和氢氧化钾购自默克化学公司（南非），而色谱甲醇则是从默克 KGaA 公司（德国）购买。磷酸二氢钾购自 Saarchem 分析公司（南非）。金印草胶囊（南非伊丽莎白港 Willow 出品的金印胶囊和美国新泽西州里奥妮亚城索尔加公司出品的索尔加全能香草）购自南非格拉姆斯顿当地的药店。固相萃取柱为 AgilentSampliQ OPT 1 mL/30mg。仪器为 1200 系列梯度 HPLC-DAD系统，分析柱为 AgilentZORBAX Eclipse Plus C18 色谱柱(4.6 mm × 75 mm × 3.5 µm)。贮备液和标准工作液的配制1000 µg/mL 的黄连碱和小檗碱的甲醇贮备溶液，-4ºC 储存。所有其它标准溶液均按要求用贮备液稀释配制。

样品制备先，对金印草胶囊样品进行均匀化处理。然后，将 200mg 均匀化处理后的样品与 50mL 的甲醇混合，用磁力搅拌器搅拌 1 小时，得到有不溶颗粒的悬浮液。然后用疏水的聚二氟乙烯（PVDF）0.45 µm–HV 滤膜（Billerica, MA，美国）过滤。甲醇萃取物按 1:3的比例用水稀释，用 0.01mol/L 的氢氧化钾溶液调 pH 值到 7。分离采用 5 µL 黄连碱—小檗碱标准物混合液（浓度均为 50 µg/mL）进行 HPLC 分离条件优化。检测波长为 242 nm，分别采用 294 nm 和350 nm 的波长进行小檗碱和黄连碱的定量。HPLC 条件列于表1 中：

结论Agilent SampliQOPT 固相萃取小柱在传统中药—金印草中黄连碱和小檗碱的分离与分析应用中表现出良好的样品净化效果。结果表明，该方法重现性好、可靠性高、回收率高（黄连碱的回收率为 101%到 106%，小檗碱的回收率为 71%到 86%），RSD %小于1%。黄连碱的检测限和定量限分别为 0.50 和 1.65 µg/mL，而小檗碱的检测限和定量限分别为 0.47 和 1.55 µg/mL。来自 Willow 的金印草样品含有 17 µg/mL 黄连碱和 35 µg/mL 小檗碱，而来自Solga 的金印草样品含有 6 µg/mL 黄连碱和 12 µg/mL 小檗碱。

原创作者：上海斯迈欧分析仪器有限公司