苯并咪唑类化合物（benzimidazoles），如涕必灵（thiabendazole），常作为杀菌剂普遍用在瓜果及农作物上。用液相色谱方法分析这些物质比较困难：例如涕必灵，在硅胶基质的色谱柱上会发生严重的拖尾现象，酸性pH分析条件下尤为明显。涕必灵和多菌（carbendazim）在pH为10的情况下使用XTerra® MS C18色谱柱会得到较好的峰形，但在较高pH值分析条件下，其他类型杀菌剂或杀虫剂可能不稳定，故难以用仅适合这些碱性杀菌剂的高pH值条件进行同时分析。

本文中，在pH值为3.7的缓冲溶液作为流动相时，用Waters公司的SunFire™ C18色谱柱进行杀菌剂的分析可以确保得到卓越的分离效果和完美的峰形。

分析的样品包括以下三类杀菌剂：

1．涕必灵和多菌灵属于弱碱性的苯并咪唑类杀菌剂；

2．丙环唑（Propiconazole）和腈菌唑（myclobutanil）属于弱碱性杀菌剂；

3．托布津（硫菌灵，thiophanate）和甲基托布津（甲基硫菌灵, thiophanate-methyl）是属弱酸性的氨基甲酸酯类（carbamate）杀菌剂。

因氨基甲酸酯类杀菌剂在高pH值的流动相中是不稳定的，所以高pH值的色谱条件不适用于这些多残留物质的同时分析。

六种杀菌剂的化学结构请参见图1。

实验条件

色谱柱：SunFire™C18色谱柱，规格2.1×100mm，颗粒度3.5μm。

流动相：A：水；B：乙腈；C：500mM甲酸铵缓冲盐溶液（pH值3.7）。

图2和图3分别给出了梯度或等度分析的结果。所有的液相色谱分析的柱温条件均为30°C。液质分析使用Waters公司的Alliance 2695分离单元与Waters公司 ZQ质谱仪联用。

质谱相对应的分析条件请参见表1（选择离子监测，SIR）。

实验结果

图2是六种杀菌剂在梯度分离的结果：所有被分析的物质都有完美的峰形。

图3是在等度分离条件下pH为3.7时涕必灵和多菌灵的分析结果。

拖尾因子为1.2(在10%的峰高处测量)，用XTerra®色谱柱在高pH值时同样能得到理想的分析结果，而在同样的分析条件下，用其他品牌的硅胶柱得到的结果要逊色的多。

样品的前处理分析方法

我们已经证明采用混和模式（阳离子交换）前处理方法可以有效提取果汁中的涕必灵和苯菌灵（benomyl）（如多菌灵）(1)。Oasis MCX吸附剂的固相提取柱不但可用于上述样品中化合物的分离，也可用于杀菌剂多残留分析的前处理。

简言之，前处理方法如下所述：

选取一支3cc的Oasis MCX小柱，先用1 mL的甲醇和1 mL的水平衡；样品用甲酸调整pH值到3后以5 mL/min速度上样，之后用1 mL的甲醇:水:浓氨水=20:89:1清洗小柱；后用2 mL 含2%氨水的甲醇溶液洗脱。因本文所研究的大部分样品并非碱性化合物，所以上样步骤须在混和模式（离子交换和反相色谱同时起作用）下（pH值为3）完成，在清洗步骤则用反相色谱（pH值为10）。由于氨基甲酸酯在水溶液中不稳定，洗脱液挥发后，再用流动相复溶。苯并咪唑的回收率为75%，其他化合物可得到95%的回收率结果。      

如果取50mL未经任何处理的地表水样品，用1mL 体积复溶，*终SPE方法的定量限优于0.3mg/L

实验结论

无论是LC还是LC-MS，SunFire™C18色谱柱都是用于分析杀菌剂的选择。三类杀菌剂都能获得优异的峰形，而且pH值为3.7的简单流动相亦同样适用于质谱分析。Oasis MCX SPE吸附剂可以有效提取这些杀菌剂，获得良好的回收率结果．

表1  MS（SIR）参数。每个离子的锥孔电压为25V。质谱仪的电离模式为ESI+。

     （离子源温度为120℃，脱溶剂温度为350℃）

图1  六种杀菌剂的化学结构式

图2   六种杀菌剂在SunFire™C18柱上的梯度分离（以标准50ng/mL进样10μL）

       梯度：10min内由90:5:5（A:B:C）到0:95:5（A:B:C）

       A：水；B：乙腈；C：500mM甲酸铵缓冲盐溶液（pH值3.7）

图3  在SunFire™C18上等度分离carbendazim和thiabendazole（以标准1μg/mL进样10μL）

     流动相：75:20:5（A:B:C）A：水；B：乙腈；C：500mM甲酸铵缓冲盐溶液（pH值3.7）

参考文献

(1) M.S. Young, M.F. Early, C.R. Mallet ａnd J. Krol, J. AOAC Int. 84, 1608-1613 (2001).

原创作者：上海斯迈欧分析仪器有限公司