言：香料自古以来就被用于食品的调味和着色。欧洲国家发生过很多香料安全性警 告事件，涉及不同种类的污染物。因此，通过种多残留分析方法同时筛查和 定量农药、真菌毒素以及着色剂的需求越来越迫切。这类分析面临的主要挑战 包括复杂的基质、大量的分析物、化合物种类的多样性，以及分析方法必须覆 盖宽泛的浓度范围等。 本应用简报评估了在动态 MRM 和快速性切换模式下运行的离子漏斗三重四 杆质谱仪对系列痕量水平分析物进行准确定量分析的性能。

此外，我们还评 估了旨在优化 MRM 间延迟时间的改良版软件和固件，其能够在低至 0.5 ms 的驻 留时间内获取高质量数据。 Agilent 6495B 三重四杆液质联用系统具有优异的灵敏度，能够定量高度 稀释的样品中的农药、真菌毒素和着色剂，在降低基质效应的同时提高方法稳 定性。

实验部分 样品处理 黑胡椒和辣椒粉购自当地杂货店，按 照 EN 15662 QuEChERS 处理方法， 使用 Agilent BondElut QuEChERS 试剂 盒（部件号 5982-6650）进行提取。 使用 QuEChERS dSPE EMR-Lipid 增强 型脂质去除净化基质试剂盒（部件 号 5982-1010）进步纯化提取物， 然后进行 Polish 净化盐析萃取（部件 号 5982-0102）。后，向提取物中加 入 2 ppb (10 µg/kg) 安捷伦综合农药混 标（部件号 5190-0551）、真菌毒素以 及着色剂标准品 (Sigma)，再用乙腈以 1:5、1:10、1:20、1:50 和 1:100 的比例 稀释加标后的提取物。 方法设计 使用 Agilent MassHunter 优化软件优化 五种真菌毒素和九种着色剂的 MRM 离子对，并使用安捷伦农药触发式多 反应监测 (tMRM) LC/MS 应用套装为 每种化合物确定至少两个 MRM 离子 对及其对应的 MS 条件。采用正离子 和负离子电喷雾电离，在动态 MRM (dMRM) 或 tMRM 模式下通过单次运 行执行分析。主要的 UHPLC 和 dMRM MS 参数如仪器条件表所示。

结果与讨论：评估经优化的 MRM 间延迟时间 我们开发了以 100 个 MRM 离子对（代 表 53 种农药）为分析目标的方法，用 于评估优化了 MRM 间延迟时间的改 良版软件和固件。图 1 显示了四个不 同的驻留时间内两种农药的叠加 MRM 色谱图，表明合适的 MRM 延迟时间 对于在短驻留时间内保持离子信号非 常重要。

方法开发及性能 我们先采用针对目标真菌毒素和着 色剂化合物进行了优化的新离子对开 发了 MRM 方法。随后，使用新的化 合物离子对和观察到的保留时间数据 更新以 250 多种农药为目标的 dMRM 方法。 UHPLC 与经过优化的 6495B 三重四 杆质谱仪相结合，能够在大多数分析 物大残留限量 (MRL) 10% 的定量下 限 (LLOQ) 水平对其进行定量分析。在 低至 2 ppt 的 LLOQ 到高至 100 ppb 的定 量上限 (ULOQ) 范围内，采用 13 个浓 度水平的标样评估方法的精度和准确 度，每个浓度执行五次重复进样。所 得结果表明，分析的精度（LLOQ 处的 RSD% < 20%，其余浓度水平 < 15%） 和平均准确度（LLOQ 处为 80%-125%， 其余浓度水平为 85%-115%）都很出色。 校准曲线的相关系数 (R2 ) 大于 0.99。

通过稀释提取物大限度降低基 质效应 对复杂样品提取物进行稀释能够大 限度降低基质效应，使得定量分析更 加准确，同时还能减少液质联用系统 所受的污染，从而提高分析稳定性。 表 1 显示了稀释操作对分析结果的改 善，其中黑胡椒样品中化合物的回收 率随着样品被进步稀释而提高。 香料是类非常具有挑战性的食品基 质，它们的性质很复杂，因而离子抑 制效应为显著。由于观察到了着色 剂化合物损失，我们不能利用传统分 散式固相萃取净化来去除干扰性基质 化合物，这又导致基质效应进步增 强。因此，稀释提取物对于降低离子 抑制效应而言十分关键，图 4 中的对 比结果表明，不同类型的香料适用的 稀释比例差别非常大。 我们所分析的样品中具挑战性的 香料基质是黑胡椒。图 5 表明，要使 化合物回收率达到 > 90% 的可接受标 准，需要使用乙腈以 1:100 的比例稀释 提取物。6495B 液质联用系统固有的灵 敏度能够有效分析以适合比例 1:100 稀释的黑胡椒样品，同时仍能检出大 多数化合物，且峰面积 RSD < 20%。

使用触发式多反应监测 (tMRM) 进行确证分析 使用 dMRM 方法评估基质效应时， 我们发现辣椒粉的空白提取液（未加 标）中存在 20 多种农药和真菌毒素。 为了进步确认此对照样品中的这些 化合物，我们使用 tMRM 方法，在 个主要离子对的基础上采集了多达六个离子对，然后将完整的化合物谱图 与采用纯标准品创建的谱库进行比 对。定量分析也使用相同的数据。在 图 6 所示的例子中，以 1:20 比例稀释的 辣椒粉提取物中赭曲霉毒素 A 和黄qu霉毒素 B1 的计算结果分别为 28 µg/kg 和 8.1 µg/kg。

结论 • 使用优化的 MRM 间延迟时间能 够将所用 MRM 驻留时间缩短至 0.5 ms，同时大限度减小分析 物信号损失 • 真菌毒素和着色剂化合物被成 功纳入 UHPLC/MS/MS 农药方 法的目标分析物中，用于测定 260 余种化合物 • 使用 Agilent 6495B 液质联用系统可提高分析灵敏度，定量高度稀释的香料提取物中的 化合物，同时降低基质效应并 提高方法稳定性 • 本文还给出了香料中真菌毒素 化合物的确证分析所用的 tMRM 采集参数

原创作者：上海斯迈欧分析仪器有限公司