本生生物解析人ELISA Kit具体操作步骤

　　人ELISA Kit又称人白介素elisa试剂盒，主要应用于双抗体夹心法测定标本中人白介素水平，用纯化的人白介素抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素，再与HRP标记的白介素抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中人白介素含量。

　　人ELISA Kit白介素试验步骤分析：

　　1、标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

　　2、加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品zui终稀释度为5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　3、温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。

　　4、配液：将30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30 倍稀释后备用

　　5、洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒后弃去，如此重复5 次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。

　　7、温育：操作同3。

　　8、洗涤：操作同5。

　　9、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15 分钟.

　　10、终止：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　11、测定：以空白空调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后15 分钟以内进行。

　　人ELISA Kit白介素实验要求：

　　1、标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融

　　2、不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

原创作者：本生（天津）健康科技有限公司