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引发人ELISA试剂盒测定结果错误的因素分析
点击次数：15733 发布时间：2020/9/23 16:07:59
引发人elisa试剂盒测定结果错误的因素分析
人ELISA试剂盒是通过化学反应的测定终产物颜色的方法进行了IgG的定量测定，广泛应用于科研领域研究，并且具有灵敏度高，操作简单等优点，但在实际操作中，影响实验结果的因素较多，在严格按照说明操作的前提下，除了正常反应外，有时常可见到一些错误结果(即假阳性或假阴性结果)。主要引发ELISA测定错误结果的原因有以下三个：标本因素，试剂因素以及操作因素。人ELISA试剂盒血清是zui常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：
1、外源性物质：外源性物质通常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存不当等原因所致。
1）标本保存不当
在冰箱中保存过久的标本，血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体，在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性;标本放置时间过长(如一天以上)，有时抗原或抗体免疫活性减弱，亦可出现假阴性。为克服上述干扰，ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定，5天内测定的血清标本可存放于4℃，1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本，蛋白质局部浓缩，分布不均，应充分混合后再测定，但混匀时应轻柔，不可强烈振荡。
2）标本受细菌污染
因菌体中可能含有内源性辣根过氧化物酶，因此，被细菌污染的标本同溶血标本一样，亦可产生非特异性显色而干扰测定结果。
3）标本溶血
由于各种人为原因引起的标本溶血，均可因红细胞破坏溶解时释放出大量具有过氧化物酶活性的血红蛋白，在以辣根过氧化物酶为标记的ELISA测定中，会导致非特异性显色，干扰测定结果。为克服上述干扰作用，标本采集时必须注意避免溶血。
4）标本管中添加物质的影响
人ELISA试剂盒抗凝剂(如肝素，EDTA)、酶抑制剂(如NaN3可抑制ELISA系统中辣根过氧化物酶活性)及快速分离血清的分离胶等均对ELISA测定有一定干扰作用。
2、内源性物质：常见的内源性物质主要有类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig(s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
1）嗜异性抗体
人类血清中含有能与啮齿类动物(如鼠等)Ig (s) 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能造成假阳性。解决的办法是：可在标本稀释液中加入过量的动物Ig (s) ，但加入量不足或亚类不同时无效。
2）嗜靶抗原的自身抗体
抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的自身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定结果。为避免以上情况出现，解决的办法是：测定前需用理化方法将其解离后再测定。
3）类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子(RF)可以与ELISA系统中的捕获抗体及酶标记二抗的FC段直接结合，从而导致假阳性。解决该情况的办法是：①用F(ab)2替代完整的IgG;②标本用联有热变性(63℃，10 min)IgG的固相吸附剂处理(将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有效);③检测抗原时，可以用2-巯基乙醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。
4）补体
ELISA系统中固相一抗和标记二抗过程中，抗体分子发生变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 可以将二者连接起来，从
原创作者：本生（天津）健康科技有限公司
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