本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断！

 大鼠胰脂肪酶(PL)酶联免疫分析试剂盒说明书

本试剂盒用于测定大鼠心机匀浆液及相关液体样本中胰脂肪酶(PL)含量。使用请仔细阅读说明书并检查试剂组分！如有疑问，请及时。

试剂盒组成：
中文名称	English name	96T/48T 含量	保存
ELISA酶标板(可拆卸）	Microelisa stripplate	8×12 / 8×6 *	2-8℃
标准(400ng/L)	Standard	1瓶 0.5ml *	2-8℃
标准稀释液	Standard diluent	1 瓶 1.5ml *	2-8℃
酶标试剂	HRP-Conjugate reagent	1 瓶 6 ml/3ml *	2-8℃
样稀释液	Sample diluent	1 瓶 6 ml/3ml *	2-8℃
显色剂 A 液	Chromogen Solution A	1 瓶 6 ml/3ml *	2-8℃
显色剂 B 液	Chromogen Solution B	1 瓶 6 ml/3ml *	2-8℃
终止液	Stop Solution	1 瓶 6 ml/3ml *	2-8℃
浓缩洗涤液	wash solution	1 瓶20ml *	2-8℃
说明书	Instruction	1份 *	2-8℃
封板膜	Closure plate membrane	2 片 *	2-8℃
密封袋	Sealed bags	1个 *	2-8℃

实验原理

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠胰脂肪酶(PL)水平。用纯化的大鼠胰脂肪酶(PL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丝裂原激活的胰脂肪酶

洗涤后加底物TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜色的深浅和样中的胰脂肪酶(PL)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样中大鼠胰脂肪酶(PL)浓度。

标本要求
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成应再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。
5. 培养细胞:检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
6. 组织标本:切割标本后，称取重量。加入定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后份待检测，其余冷冻备用。
7. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
8.不能检测含NaN3的样，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

试验所需自备物:
1. 酶标仪(450nm波长滤光片)
2. 高精度移液器，EP管及次性吸头
3. 37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
4. 吸水纸

操作步骤
1. 标准的稀释：本试剂盒提供原倍标准支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
200ng/L
5号标准
150μl的原倍标准加入150μl标准稀释液
100ng/L
4号标准
150μl的5号标准加入150μl标准稀释液
50ng/L
3号标准
150μl的4号标准加入150μl标准稀释液
25ng/L
2号标准
150μl的3号标准加入150μl标准稀释液
12.5ng/L
1号标准
150μl的2号标准加入150μl标准稀释液

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样孔。在酶标包被板上标准准确加样50μl，待测样孔中先加样稀释液40μl，然后再加待测样10μl（样zui终稀释度为5倍)。加样将样加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4. 配液：将30倍（48T 的20 倍）浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
8. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样的OD值代入方程式，计算出样浓度，再乘以稀释倍数，即为样的实际浓度。
注意事项:
1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。次加样时间控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
4． 请每次测定的同时做标准曲线，做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准孔孔的OD值），请先用样稀释液稀释定倍数（n倍）后再测定，计算时请zui后乘以总稀释倍数（×n×5）。
5． 封板膜只限次性使用，以避免交叉污染。
6．底物请避光保存。
7．严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
8．所有样，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9．本试剂不同批号组分不得混用。

大鼠胰脂肪酶（PL）elisa试剂盒说明书
实验目的、灵敏度、检测范围和重复性:
●实验目的：测定大鼠心机匀浆液样本中胰脂肪酶(PL)含量。
●灵敏度：zui小可测          3.6ng/L。
●检测范围           6ng/L - 220ng/L。
●重复性：板内，板间变异系数均<10%。

原创作者：本生（天津）健康科技有限公司