技术文献分享-ELISA实验中检测抗原的方法

　　1、双抗体夹心法

　　针对至少2个抗原决定簇的多价抗原。先介绍下抗原决定簇，抗原决定簇就是决定抗原性的特殊化学基团，也叫抗原表位，理论上个抗原决定簇能诱导产生种单克隆抗体。由6-12氨基酸或碳水基团组成，它可以是由连续序列(线性表位)组成或由不连续的蛋白质三维结构(构象表位)组成。临床上具有2个抗原决定簇的多价抗原有很多，比较常见有HBSAG、AFP、HCG等大分子抗原。检测步骤也简单，就是包被、洗涤、加样、洗涤、加样、洗涤、显色。具体说来是先将纯化的相应抗体包被在固相载体上，再加入待测样品，若其中含有待测抗原就会与固相抗体结合，洗掉杂质后，再加入酶标记的检测抗体进行反应，洗掉多于的酶标抗体后，加入底物显色，显色与否以及颜色的深浅就代表了待测抗原是否存在以及相对含量。

　　对于双抗体夹心法检测大分子抗原要注意几点：

　　(1)固相抗体和酶标检测抗体定是分别针对待测抗原的两个不同抗原决定簇，不然两个抗体就会为争同个决定簇而打架，会出现假阴性的不良结果。

　　(2)如果检测的样本是血清，就要注意风湿病患者体内内风湿因子RF这种奇葩异种抗体的存在，它能够结合固相抗体和检测抗体，造成假阳性的不良结果。

　　(3)包被的固相抗体含量定是高于样品中的抗原含量，不然检测到的含量会比实际含量低。

　　(4)如果想高端省事些，将待测样品与酶标检测抗体同时加入固相载体，在酶标检测抗体高于样品中的待测抗原的情况下出现假阴性结果，这种现象书本叫钩状效应。

　　2、竞争法

　　针对小分子抗原。这种方法也可以用于大分子抗原，只是相对双抗夹心法这种强悍的策略，竞争法完全没有优势，所以竞争法只在检测小分子这个边缘地带发挥余热了。临床上主要用于T3、T4、孕酮等激素以及药物等。检测步骤与双抗夹心法更简单，包被、洗涤、加样、洗涤、显色，少了步加样的过程，但是设计上复杂些，先将纯化的相应抗体包被在固相载体上，然后每组样本需要分两组，组同时加入事先混匀好的酶标检测抗原和样本的混合物，组只加入酶标记抗原，两组颜色差便是待测抗原的含量。

　　对于竞争法也需要注意点，酶标记抗原和待测样本定要事先混匀好，然后同时加入固相载体，不然会造成不公平竞争，检测出现偏差。

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