ELISA原理和具体试验方法以及结果处理?
 

　　ELISA检测试剂盒应用定性夹心免疫检测技术，用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板条，这些多肽是中国型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段，分别来自于该毒株的开放阅读框2和开放阅读框3。将样品或标准品加入孔中并孵育，如果其中存在HEV IgM抗体，这些抗体就会与HEV 的多肽抗原结合，并固定在上面，洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根过氧化物酶)酶结合物，经第二次孵育后，酶结合物就会与次孵育结合上的HEV IgM抗体相结合，洗板除去未结合的酶结合物，加入TMB底物溶液，在第三次孵育时会发生酶-底物反应，只有那些含有HEV IgM抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化，加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应，并在波长: 450nm处测量O.D.值,按照本HEV IgM抗体elisa试剂盒 的测试标准, O.D.值大于或等于Cut-Off值的样品被认为是初试阳性操作步骤：
 

　　1. 使用，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

　　2. 根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　3. 加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育45分钟。

　　4. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　5. 每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

　　6. 甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

　　7. 每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育5分钟。避免光照。

　　8. 取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

　　9. 在450nm波长处测定各孔的OD值。

　　结 果 判 断 与 分 析：

　　1、 仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值

　　2、 以吸光度OD值为纵坐标(Y)，相应的S-100B标准品浓度为横坐标(X)，做得相应的曲线，样品的S-100B含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度，再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

　　3、 检测值范围： 0-200ng/ml

　　4、 敏感度：1.0ng/ml

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原创作者：本生（天津）健康科技有限公司