教你正确操作小鼠免疫球蛋白A(IgA)elisa试剂盒

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒检测原理:

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒采用双抗体步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被对称性免疫球蛋白A(IgA)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的对称性免疫球蛋白A(IgA)试剂盒呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度。小鼠免疫球蛋白试剂盒样品收集、处理及保存方法:

　　1、血清－－－－-操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2、血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。细胞上清液－－-1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　3、组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟。

　　4、取上清液保存－－－－－－如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。

　　注：标本溶血会影响后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒操作:

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒使用，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

　　标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加次。每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加次。每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。在450nm波长处测定各孔的OD值。局限6号标准品以上的结果为非线性的，根据此标准曲线无法得到精确的结果。

　　小鼠免疫球蛋白试剂盒：

　　1、灵敏度：小的检测浓度小于1号标准品。稀释度的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为1.0 nmol/L。

　　2、特异性：不与其它细胞因子反应。

　　3、重复性：板内、板间变异系数均小于10%。

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