实验分享：PCR实验步骤
 

　　PCR即聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)不仅是DNA分析常用的技术，而且在DNA重组与表达、基因结构分析和功能检测中具有重要的应用价值。

　　1. PCR体系中的5个要素： 模板(Template)，引物(Primer)，酶(polymerase)，dNTP，缓冲液(Buffer，含有Mg2+)。现在许多公司已推出酶、dNPT、Buffer配成的Mix Buffer，使用更为方便。

　　2. 20uL的PCR反应体系：

　　模板DNA 2μL

　　引物1 1μL，10～100pmol

　　引物2 1μL，10～100pmol

　　dNTP 1.5μL，各200umol/L

　　MgCl2 2μL

　　10×buffer 2μL

　　ddH2O 10μL

　　Taq酶 0.5μL(2.5U)

　　在PCR管中依次加入上述溶液，Taq酶后加入。

　　3. PCR反应条件:

　　预变性：95℃ 3min

　　变性：95℃ 45s

　　退火：45℃ 45s

　　延伸： 72℃ 45s

　　延伸：5min

　　结束：4℃

　　其中变性-延伸过程循环30次。

　　现在有些PCR因为扩增区很短,即使Taq酶活性不是也能在很短的时间内复制完成,因此可以改为两步法,即退火和延伸同时在60℃-65℃间进行,以减少一次升降温过程,提高了反应速度.

　　PCR 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。

原创作者：本生（天津）健康科技有限公司