古朵分享——ELISA免疫测定,您真的了解吗?
 

　　ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。此项技术自70年代初问世以来，发展十分迅速，目已被广泛用于生物学和医学科学的许多域。ELISA免疫测定,您真的掌握透彻了吗?

　　ELISA免疫测定目的是?

　　1.测定体液中的各种蛋白质，包括含量少的蛋白质如甲胎蛋白等;

　　2.测定激素，包括小分子量的甾体激素等;

　　3.测定抗生素和药物;

　　4.测定病原体抗原，HBsAg、HBeAg等;

　　5.利用纯化的抗原检测标本中的抗体，例如抗-HBs等;

　　ELISA免疫测定原理：

　　①使抗原(或抗体)结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性;

　　②使抗原(或抗体)与某种酶联结成酶标 抗原(或抗体)，而且此酶标抗原(或抗体)既保留其免疫活性，又保留其酶活性;

　　③测定时将受检标本(抗体或抗原)和酶标抗原(或 抗体)按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体进行反应，再用洗涤方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其它物质分开，zui后结合 在固相载体上的酶量与标本中受检的抗体或抗原量成一定比例;再加入酶反应底物后，底物被酶催化后变为有色产物，根据其颜色反应的 深浅进行定性或定量分析，以了解被测标本中抗体或抗原含量。

　　ELISA免疫测定步骤：

　　1.包被;

　　2.加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔);

　　3.加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟;

　　5.终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml;

　　6.结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或浅。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm处，以空白对照孔调零后测各孔OD值。

　　注意：引起ELISA测定错误结果的原因有标本因素、试剂因素、操作因素。如果您在操作中遇到任何不明白的，不妨来电详询本公司业务员，我们将为您免费安排技术指导服务(代测、培训、委托加工、定制等)。上海恒远生物将与广大科研工作者一起交流科研问题，共同提高，让您成为真正的科研能手。

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