兔抗胸腺细胞球蛋白(ATG)ELISA检测试剂盒
 

　　在科学研究的广阔域中，酶联免疫吸附实验(ELISA)作为一种高灵敏度、高特异性的检测方法，被广泛应用于生物学、医学、农业等多个域。其中，兔抗胸腺细胞球蛋白(ATG)ELISA检测试剂盒更是因其独特的检测对象和广泛的应用范围而备受关注。本文将详细介绍兔抗胸腺细胞球蛋白(ATG)ELISA检测试剂盒的基本原理、使用方法、注意事项及其在科研中的应用。

　　一、试剂盒的基本原理

　　兔抗胸腺细胞球蛋白(ATG)ELISA检测试剂盒基于固相夹心法酶联免疫吸附实验的原理。该方法通过已知的ATG标准品和待测样品中的ATG与酶标抗体之间的特异性反应，形成抗原-抗体复合物，并通过酶促反应产生颜色变化，颜色的深浅与样品中ATG的浓度呈正比。具体而言，试剂盒中的微孔板被纯化的ATG抗原包被，形成固相抗原。待测样品中的ATG与包被的抗原结合后，再加入HRP(辣根过氧化物酶)标记的特异性抗体，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物。经过洗涤去除未结合的成分后，加入底物TMB(四甲基联苯胺)，在HRP的催化下产生蓝色产物，随后在酸的作用下转化为黄色。通过酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值)，即可根据标准曲线计算出样品中ATG的浓度。

　　二、试剂盒的使用方法

　　1. 准备阶段：将试剂盒从冷藏环境中取出，在室温下平衡15-30分钟。按照说明书配制所需的洗涤液、标准品等试剂。

　　2. 标准品稀释与加样：在酶标包被板上设置标准品孔，并依次加入不同浓度的标准品和稀释液，混匀后形成浓度梯度。同时设置空白孔和待测样品孔，加入样品稀释液和待测样品。

　　3. 温育与洗涤：用封板膜封板后，将酶标板置于37℃温育一定时间。之后揭去封板膜，弃去液体，用洗涤液反复洗涤酶标板.

　　试剂盒操作注意事项

　　1) 试剂应按标签说明书储存,使用恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存。2)实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质

　　3) 不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质使用。

　　4) 使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。

　　5) 使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。

　　6) 洗涤酶标板时应充分拍干,不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

　　7) 底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露干光下。避免用手接触,有毒，实验完成后应立即读取OD值。

　　8) 加入试剂的顺序应一致,以所有反应板孔温育的时间一样。

　　9) 按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

　　兔抗胸腺细胞球蛋自(ATG)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法1)血清－－－－操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后,1000xg离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

　　2) 血浆－－－－-EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000xg离心30分钟去除颗粒。

　　3) 细胞上清液－－-1000xg离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　4) 组织匀浆－－－－-将组织加入适量生理盐水捣碎。1000xg离心10分钟,取上清液.

　　5) 保存－－如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70 ℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或GXZ血。如果血清中大量颗粒检测先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

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原创作者：本生（天津）健康科技有限公司