人转化生长因子α(TGF-α)ELISA试剂盒使用说明

　　‌试剂准备与样品收集‌：

　　‌血清‌：使用不含热原和内毒素的试管，避免细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟分离血清和红细胞。

　　‌血浆‌：使用EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝，3000转离心30分钟取上清。

　　‌细胞上清液‌：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

　　‌组织匀浆‌：将组织加入适量生理盐水捣碎，3000转离心10分钟取上清。

　　‌保存‌：样本收集后应及时检测，否则按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融‌。

　　‌试剂盒保存与处理‌：

　　‌试剂盒保存‌：试剂盒应保存在2-8℃(频繁使用时)或-20℃(较长时间不用时)。

　　‌洗涤液处理‌：浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶‌。

　　‌实验步骤‌：

　　‌标准品配制‌：使用加入0.5ml蒸馏水混匀，配成20ng/ml的溶液。设标准管8管，管加标本稀释液900ul，其余各管加入标本稀释液500ul。在管中加入20ng/ml的标准品溶液100ul混匀后用加样器吸出500ul移至第二管，如此反复对倍稀释，第八管为空白对照‌。

　　‌标本激活‌：将450ul标本稀释液加入到一支1.5ml进口聚丙烯管中，再加10ul血清或血浆标本，加20ul 1N HCI，盖紧，上下混匀。2-8℃放置60±2分钟‌。

　　‌ELISA检测‌：采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被转化生长因子α(TGF-α)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的TGF-α呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)，计算样品浓度‌。

　　‌注意事项‌：

　　‌试剂盒保存‌：试剂盒应保存在2-8℃或-20℃，使用室温平衡20分钟。

　　‌洗涤液处理‌：从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，水浴加热使结晶溶解后再使用。

　　‌实验操作‌：严格按照说明书操作，所有液体组分使用充分摇匀。实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封保存。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下‌。

　　通过以上步骤，可以方便、快速和准确地测定TGF-α的浓度，为相关疾病的诊断和治疗提供参考依据‌。

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原创作者：本生（天津）健康科技有限公司