技术文章：试剂A—抗坏血酸过氧化物酶(APX)试剂盒
 

　　产品说明：

　　APX是抗坏血酸代谢的关键酶，也是植物清除活性氧的重要抗氧化酶。APX于叶绿体、胞质、线粒体、过氧化物和乙醛酸体，以及过氧化体和类囊体膜上分别具有多种同功酶。APX是植物AsA的主要消耗者，它可以催化H2O2氧化AsA。在胁迫和解胁迫条件下，APX 与 AsA 具有一定的负相关性，APX的活性可以直接影响AsA的含量。APX催化H2O2氧化AsA，通过测定AsA的氧化速率，可计算得APX活力。实验需要低温离心机、紫外分光光度计、1ml石英比色皿、研钵、移液枪、冰和蒸馏水等仪器和试剂：。

　　操作步骤：

　　一、粗酶液提取：

　　组织质量(g)为例：试剂的体积(ml)为1：5~10的比例(建议称取约0.1g组织，加入1ml 试剂A)在冰水浴中匀浆。13000g，4℃离心20min，取上清放在冰上待测。

　　二、测定操作表：

　　1. 分光光度计需提预热30min以上，调节波长到290nm，用蒸馏水调零。

　　2. 试剂A需要在25℃中预热30min以上。

　　3. 测定管：在1ml石英比色皿中依次加入100μl上清液、700μl预热的试剂A、100μl试剂B 和100μl试剂C，快速混合均匀后在290nm测定10s和130s光吸收A2和 A1，△ A=A2-A1。

　　APX 活力计算：

　　(1)按样本蛋白浓度计算活性

　　单位定义：1U=每毫克蛋白每分钟氧化1μmolAsA。

　　APX(μmol/min/mgprot)=△A÷(ε×d)×V 反总×106÷(Cpr×V 样)÷T =1.79×△A÷Cpr

　　(2)按样本质量计算

　　单位的定义：1U=每g组织每分钟氧化1μmolAsA。

　　APX(U/g)=△A÷(ε×d)×V 反总×106÷(W×V 样÷V 样总)÷T=1.79×△A÷W ε：AsA 在 290nm 处摩尔吸光系数为 2.8×103L/mol/cm;d：比色皿光径(cm)，1cm;V 反总：反应体系总体积(L)，1000μl=1×10-3L;106：1mol=1×106μmol;V 样：加入反应体系中上清液体积(mL)，100μl=0.1ml;V 样总：加入提取液体积，1ml;W，样本质量，g;T：催化反应时间(min)，2min。

　　注意事项：试剂配制好后需4℃保存，并且在3天内使用完。

　　抗坏血酸过氧化物酶(APX)试剂盒 本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生移液器吸头