微囊藻毒素(MC)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

本试剂盒仅供研究使用。

使用目的：

本试剂盒用于测定相关液体样本中微囊藻毒素(MC)的含量。

实验原理

本试剂盒应用酶联免疫竞争法测定标本中微囊藻毒素(MC)水平。用纯化的微囊藻毒素(MC)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入微囊藻毒素(MC)，和 HRP标记的微囊藻毒素(MC)抗原，使它们竞争结合，，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。样本颜色的深浅和样品中的微囊藻毒素(MC)的含量呈负相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中微囊藻毒素(MC)的含量。

ELISA试剂盒组成：
试剂盒组成48 孔配置96 孔配置保存
说明书1 份1 份
封板膜2 片(48)2 片(96)
密封袋1 个1 个
酶标包被板1×481×962-8℃保存
标准品：540μg/L0.5ml×1 瓶0.5ml×1 瓶2-8℃保存
标准品稀释液1.5ml×1 瓶1.5ml×1 瓶2-8℃保存
酶标试剂3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
样品稀释液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂 A 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
显色剂 B 液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
终止液3 ml×1 瓶6 ml×1 瓶2-8℃保存
浓缩洗涤液(20ml×20 倍)×1 瓶(20ml×30 倍)×1 瓶2-8℃保存

标本要求

1.标本处理：(1)水样采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查

(2)组织

样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，备查

2.不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

操作步骤

1.加样：分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

2.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。

4.配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 后弃去，如此重复 5 次，拍干。

6.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色215 分钟.

7.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

8.测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。

计算

以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。

注意事项

1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

4. 请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物请避光保存。

7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

9.本试剂不同批号组分不得混用。

检测范围：

30 ng/L -850 ng/L

规格：

96 人份/盒

保存条件及有效期

1.试剂盒保存：;2-8℃。

2.有效期：6 个月
 

微囊藻毒素(MC)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书