土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒（可见分光光度法） 天津本生

　　检测方法:可见分光光度法 Spectrophotometer

　　中文名称:土壤中性蛋白酶活性检测试剂盒

　　储存条件:2-8℃

　　单位:盒

　　有效期:6个月

　　英文名称:Soil Neutral Protease Activity Assay Kit

　　检测方法:可见分光光度法 Spectrophotometer

　　规格:50T/24S

　　产品组成：使用请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

　　试剂名称 规格 保存条件

　　试剂一 液体 20 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂二 粉剂×2 瓶 2-8°C保存

　　试剂三 液体 12 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂四 液体 40 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　试剂五 液体 10 mL×1 瓶 2-8°C保存

　　标准液 液体 1 mL×1 支 2-8°C保存

　　溶液的配制：

　　1、 试剂二：临用取 1 瓶加入 6 mL 试剂一，沸水浴搅拌溶解后待用，用不完的试剂可以 2-8°C保存 4 周;

　　2、 标准液：20μmol/mL 酪an酸溶液。

　　产品说明：

　　土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源。土壤中性蛋白酶在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。中性条件下，土壤中性蛋白酶可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝，

　　在680nm有特征吸收峰。

　　Casein Tyrosine

　　Phosphomolybdic acid + Tyrosine Tungsten blue 680nm

　　注意：实验之建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

　　需自备的仪器和用品：

　　可见分光光度计、可调式移液枪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、1mL玻璃比色皿、蒸馏水、研钵、30-50目筛。

　　操作步骤：

　　一、样本处理(可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献)新鲜土样自然风干或 37°C烘箱风干，过 30~50 目筛。

　　二、测定步骤

　　1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至680nm，蒸馏水调零。

　　2、 标准溶液的稀释：取10μL 20μmol/mL酪氨酸标准液，加入990μL蒸馏水，充分混匀，配制成0.2μmol/mL标准液使用，现用现配。(实验中每管需要220μL，为减小实验误差，故配制大体积。)

　　3、 样本测定：

　　试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管

　　风干土样(g) 0.1 0.1 - -

　　试剂一(μL) 100 100 - -

　　试剂二(μL) 200 - - -

　　充分混匀后，37°C水浴/恒温培养箱中反应24h，期间振荡5-6 次，

　　使土样与反应液充分接触。 - -

　　试剂三(μL) 200 200 - -

　　试剂二(μL) - 200 - -

　　混匀，10000rpm 室温离心10min，取上清液待测。 - -

　　上清液(μL) 220 220 - -

　　0.2μmol/mL标准液(μL) - - 220 -

　　蒸馏水(μL) - - - 220

　　试剂四(μL) 650 650 650 650

　　试剂五(μL) 130 130 130 130

　　充分混匀，40°C水浴或恒温培养箱培养 10min，10000rpm 室温离心 10min，取 1mL 上清液于 680nm 下读取各管吸光值 A，分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。(标准管、空白管只需测 1-2 次，每个测定管需设一个对照管。)

　　三、土壤中性蛋白酶活性计算

　　单位定义：每天每g土样中产生1μmoL酪氨酸为一个土壤中性蛋白酶活力单位。土壤中性蛋白酶(U/g 土样)=C标准管×ΔA测定÷ΔA标准×V反总÷W÷T= 0.1×ΔA测定÷ΔA标准÷W

　　C标准管：标准管浓度，0.2μmol/mL;V反总：酶促反应总体积，0.5mL;T：反应时间，1d;W：样本质量，g。

　　注意事项

　　当吸光值大于1时，建议将上清液用蒸馏水稀释后进行测定，计算时注意乘以稀释倍数。

　　实验实例：

　　1、 分别称取 2 份 0.1g 三叶草土于 1.5mL EP 管中，分别为对照管及测定管，按照测定步骤操作，使用 1mL 玻璃比色皿测定吸光度，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管=0.320-0.218=0.102，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管=0.540-0.028=0.512，按土壤质量计算酶活得：

　　土壤中性蛋白酶(U/g 土样)=0.1×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W = 0.1×0.102÷0.512÷0.1=0.1992 U/g 土样。

　　2、 分别称取 2 份 0.1g 林土于 1.5mLEP 管中，分别为对照管及测定管，按照测定步骤操作，使用 1mL 玻璃比色皿 测 定 吸 光 度 ， 计 算 ΔA 测 定 =A 测 定 管 -A 对 照 管 =0.195-0.135=0.06 ， ΔA 标 准 =A 标 准 管 -A 空 白 管=0.540-0.028=0.512，按土壤质量计算酶活得：

　　土壤中性蛋白酶(U/g 土样)=0.1×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W = 0.1×0.06÷0.512÷0.1=0.1172 U/g 土样。

　　测定意义：土壤蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化，其水解产物是高等植物的氮源。S-NPT在中性环境下催化蛋白质水解，与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。

　　测定原理：中性条件下，S-NPT可将酪蛋白水解产生酪氨酸;在碱性条件下，酪氨酸还原磷钼酸化合物生成钨蓝;在680nm有特征吸收峰。

　　试验中所需的仪器和试剂：可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、1ml玻璃比色皿、蒸馏水

　　备注：

　　以上数据均来自公开文献, 暂未进行独立验证, 仅供参考。

　　土壤中性蛋白酶活性检测 试剂盒 本生生物公司供应：荧光定量PCR耗材，细胞培养类，核酸提取耗材，试剂包装类，生物试剂，色素，原料，抗原抗体，试剂盒等，通用耗材包括深孔板、96孔硅胶垫、吸头、封板膜、玻片、试管、量杯、试剂槽、离心管、移液器等。