缓冲液、RIPA裂解液(强,无抑制剂)

　　规格：100ml 500ml

　　产品名称：RIPA裂解液(强无抑制剂)

　　保质期：1年

　　保存条件：-20℃

　　简介：

　　多种成分均可以从细胞中提取总蛋白，例如 Triton、SDS、NP-40 等。RIPA 裂解液(强)(Enhanced RIPA lysis buffer ,without inhibitors)是采用一种经典的细胞组织快速裂解，并获得总蛋白的裂解液，其裂解强度大于 NP-40 裂解液、RIPA 裂解液(中)。Enhanced RIPA lysis buffer without inhibitors 主要由 Tris 、NP-40、 sodium deoxycholate 等组成，不含蛋白酶和磷酸酶抑制剂，并维持原有的蛋白间相互作用。

　　组成：

　　保存条件：

　　-20℃保存，一年有效。

　　操作步骤(仅供参考)：

　　(一)贴壁培养细胞

　　1、取 Enhanced RIPA lysis buffer 室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。

　　2、去除贴壁细胞的培养液，，低速离心，弃上清。

　　3、按照 6 孔板每孔加入 150～250μl 含有 PMSF 的裂解液的比例，加入 RIPA Lysis Buffer 。移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触。置于冰上或 4℃裂解。通常裂解液作用于细胞 1～3 内，细胞就会被裂解。

　　4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

　　5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　(二)悬浮培养细胞

　　1、取 Enhanced RIPA Lysis Buffer 室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制

　　剂。

　　2、低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

　　3、用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150～250μl 裂解液的比例，

　　加 入 Enhanced RIPA Lysis Buffer。

　　4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

　　5、进行后续的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　(三)组织样本

　　1、取 Enhanced Lysis Buffer 置于室温溶解混匀，根据需要选择添加或不添加抑制剂。

　　2、把组织剪切成细小的碎片，越小越好。取在液氮或超低温冰箱中冷冻以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在 1～2min 之内，以减少蛋白的降解。

　　3、按照每20mg 组织加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的裂解液。冰上或 4℃裂解。

　　4、离心(如无低温离心机，室温下离心亦可)，取上清。

　　5、进行后续的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

　　注意事项：

　　1、 去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。

　　2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

　　3、 如果细胞量较多，必需分装成 50～100 万细胞/离心管，然后再裂解。

　　4、 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切后直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex 使样品裂解充分。

　　5、 溶解 Regal RIPA Lysis Buffer 时，应尽量缩短溶解时间，避免有效成分失效。

　　6、 裂解产物中经常会出现一小团透明胶状物，属正常现象。

　　7、 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或 4℃进行。

　　8、本产品仅供科研使用，严禁它用。

　　缓冲液、RIPA裂解液(强,无抑制剂)本生一直视质量控制为企业的生命，追求企业竞争力的不断提升。公司在经营中始终秉承：遵纪守法，严于律己，宽仁以待，敢于承担的企业精神作为标准，以过硬的质量和优良的服务来维护和拓展市场，较大限度的满足客户的需求。与客户的共赢，是我们的发展目标。本生!您信任的合作伙伴。我们愿与您真诚合作，共创美好的未来。本生移液器吸头