乙酰乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)酶联免疫分析试剂盒  BS-0029

　　本试剂盒仅供研究使用。

　　检测范围：

　　96T

　　0.3ng/L - 18 ng/L

　　使用目的：

　　本试剂盒用于测定微生物中乙酰乙酰辅酶 A(Acetoacetyl-CoA)含量。

　　实验原理

　　本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中乙酰乙酰辅酶 A(Acetoacetyl-CoA)水平。用纯化 的乙酰乙酰辅酶 A(Acetoacetyl-CoA)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中 依 次 加 入 乙 酰 乙 酰 辅 酶 A(Acetoacetyl-CoA) ， 再 与 HRP 标 记 的 乙 酰 乙 酰 辅 酶 A(Acetoacetyl-CoA)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深 浅和样品中的乙酰乙酰辅酶 A(Acetoacetyl-CoA)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸 光度(OD 值)，通过标准曲线计算样品中乙酰乙酰辅酶 A(Acetoacetyl-CoA)浓度。

　　试剂盒组成

　　1 30 倍浓缩洗涤液 20ml×1 瓶 ; 2 酶标试剂 6ml×1 瓶

　　3 酶标包被板 12 孔×8 条 ; 4 样品稀释液 6ml×1 瓶

　　5 显色剂A 液 6ml×1 瓶 ; 6 显色剂B 液 6ml×1/瓶

　　7 终止液 6ml×1 瓶; 8 标准品(48ng/ml) 0.5ml×1 瓶

　　9 标准品稀释液 1.5ml×1 瓶; 10 说明书 1 份

　　11 封板膜 2 张; 12 密封袋 1 个

　　标本要求

　　1.标本处理：(1)水样 采集后经 -20℃反复冻融三次，再经玻璃纤维过滤后，备查

　　(2)组织

　　样品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提，或按相 关文献提取进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验， 可将标本放于-20℃保存，备查

　　2.不能检测含 NaN3 的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。

　　乙酰乙酰辅酶A(Acetoacetyl-CoA)试剂盒操作步骤

　　1. 加样：分别设标准孔、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、 待测样品孔。在酶标包被板上标准孔中加 50 微升，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl， 然后再加待测样品 10μl(样品终稀释度为 5 倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

　　2. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

　　3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 60 分钟。

　　4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用

　　5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 后弃去，如此 重复 5 次，拍干。

　　6. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

　　15 分钟.7. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。

　　8. 测定：以空白孔调零，450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。 测定应在加终止 液后 15 分钟以内进行。

　　计算

　　以标准物的浓度为横坐标，OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。

　　注意事项

　　1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 1 小时后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。

　　2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。

　　3.各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。

　　4. 请每次测定的同时做标准曲线，好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值 大于标准品孔孔的 OD 值)，请先用样品稀释液稀释一定倍数(n 倍)后再测定，计 算时请后乘以总稀释倍数(×n×5)。

　　5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

　　6.底物请避光保存。

　　7.严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.

　　8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。

　　9.本试剂不同批号组分不得混用。

　　检测范围：

　　10 ng/L -500ng/L

　　规格：

　　96 人份/盒 48人份/盒

　　保存条件及有效期

　　1.试剂盒保存：;2-8℃。

　　2.有效期：6 个月