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BY4741 感受态细胞多少钱
点击次数:77发布时间:2019/8/21 10:22:35
更新日期:2024/9/10 16:56:45
所 在 地:中国大陆
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详细内容
主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大,直观的说,使得细胞膜表面出现一些孔洞,便于外源基因或载体进入感受态细胞。由于细胞膜的流动性,这种孔洞会被细胞自身所修复。CaCl2法
1.将快速生长的大肠杆菌置于经低温(0℃)预处理的低渗氯化钙溶液中,便会造成细胞膨胀,同时Ca2+会使细胞膜磷脂双分子层形成液晶结构,促使细胞外膜与内膜间隙中的部分核酸酶解离开来,离开所在区域,诱导细胞成为感受态细胞
BY4741 感受态细胞多少钱细胞膜通透性发生变化,极易与外源DNA相粘附并在细胞表面形成抗脱氧核糖核酸酶的羟基-磷酸钙复合物。
联合其它的二价金属离子(如Mn、Co)、DMSO或还原剂等物质处理细菌,则可使转化率提高100~1000倍。
BY4741 感受态细胞多少钱2.此时,将该体系转移到42℃下做短暂的热刺激(90s),细胞膜的液晶结构会发生剧烈扰动,并随机出现许多间隙,外源DNA就可能被细胞吸收。进入细胞的外源DNA分子通过复制、表达,实现遗传信息的转移,使受体细胞出现新的遗传性状。
BY4741 感受态细胞多少钱3.将转化后的细胞在选择性培养基上培养,筛选出带有外源DNA分子的阳性克隆。在冰箱中保存过久的标本,血清中IgG可聚合成多聚体、AFP可形成二聚体,在间接法ELISA测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性;标本放置时间过长(如一天以上),有时抗原或抗体免疫活性减弱,亦可出现假阴性。为克服上述干扰,ELISA测定的血清标本宜为新鲜采集;如不能立即测定,5天内测定的血清标本可存放于4℃,1周后测定的血清标本应低温冻存;冻存后融解的标本,蛋白质局部浓缩,分布不均,应充分混合后再测定,但混匀时应轻柔,不可强烈振荡。
电转法
电击法不需要预先诱导细菌的感受态,依靠短暂的电击,促使DNA进入细菌,转化率能达到109~1010转化子/ug闭环DNA。因操作简便,愈来愈为人们所接受
意义编辑
将构建好的载体转入感受态细胞进行表达,不仅可以检验重组载体是否构建成功,*主要的是感受态细胞作为重组载体的宿主可以进行后续实验,如蛋白质表达纯化等工作。
JM110 Chemically Competent Cell |
XL1-Blue Chemically Competent Cell |
XL1-Blue MRF`Kan Chemically Competent Cell |
XL2-Blue Chemically Competent Cell |
XL10-Gold Chemically Competent Cell |
DB3.1 Chemically Competent Cell |
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HB101 Chemically Competent Cell |
SURE Chemically Competent Cell |
DH10B Chemically Competent Cell |
DH10Bac Chemically Competent Cell |
BJ5183 Chemically Competent Cell |
BJ5183-AD-1 Chemically Competent Cell |
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EPI400 Chemically Competent Cell |
EPI300 Chemically Competent Cell |
GT115 Chemically Competent Cell |
MC1061F- Chemically Competent Cell |
S17-1 Chemically Competent Cell |
JM330 Chemically Competent Cell |
MG1655 Chemically Competent Cell |
BW25113 Chemically Competent Cell |