该检测试剂盒基于间接竞争酶免疫法检测黄曲霉毒素M1。偶联抗原预先包被在微孔条上。样品中的黄曲霉毒素M1和预先包被在微孔条上的偶联抗原竞争抗黄曲霉毒素M1抗体。在添加酶缀合物之后，添加TMB底物用于着色。样品的光密度（OD）值与样品中的黄曲霉毒素M1呈负相关。将该值与标准曲线比较，随后获得黄曲霉毒素M1残留物。

2.技术规格

灵敏度：0.03 ppb

保温箱温度：25℃

保温时间：30min〜15min

检测限：

牛奶.................................... 0.1ppb

奶粉，酸奶………………………………………………0.3ppb

交叉反应率：

黄曲霉毒素M1…….100％

黄曲霉毒素B1…….12.9％

黄曲霉毒素B2…….1.4％

黄曲霉毒素G1….1.9％

黄曲霉毒素G2…….0.3％

恢复率：

牛奶……………………………………………………………….. 90±25％

奶粉，酸奶…………………………………………………………100±30％

3.组成

1条微孔板条12条带条，每条板条有8个可移动孔

2 6×标准溶液（各1 mL）0ppb 0.03ppb

0.09ppb 0.27ppb

0.81ppb 2.43ppb

3酶结合物7毫升红色帽子

4抗体工作液7ml蓝盖

5底材7毫升白色盖子

6底物B 7毫升黑盖

7 Stop Solution 7ml黄色盖子

8 20×浓缩洗涤缓冲液40ml白色盖子

9 10×浓缩再溶解溶液50ml透明盖

4.所需材料但未提供

1）设备：ELISA读取器（450 nm / 630nm），匀浆器，振荡器，离心机，天平：灵敏的0.01g，氮气干燥设备，培养箱，移液管，打印机

2）微量移液器：单通道20µl〜200µl，100µl〜1000µl，多通道30〜300μl

5.样品预处理

1）实验中只能使用一次性吸头，并且在吸收不同试剂时必须更换吸头；

2）在进行实验之前，必须清洁每个说明（预处理前必须注意以下几点）

实验用具，并在必要时进行重新清洁，以避免污染干扰实验结果。

样品预处理之前的溶液制备：

1）样品再溶解溶液

使用1份10x浓缩的再溶解溶液，并用9份去离子水溶解，以获得可立即使用的样品再溶解溶液。

样品制备

5.1原料奶和成品奶样品的制备

1）取出原奶和成品奶样品，置于室温下，待样品回到室温后直接进行测试。

2）取50μl进行测试

稀释倍数：1

5.2奶粉样品的制备

1）将1.0±0.05g奶粉样品放入50ml离心管中;加入10ml样品溶解溶液，充分摇动3min，在20℃以4000r / min以上的速度离心10min。

2）取50µl上清液进行测试。

稀释系数：10

5.3酸奶样品的制备

1）取1ml酸奶样品，以1：9的样品再溶解溶液稀释（100ul酸奶+ 900ul样品再溶解溶液），混合30s；

2）取50μl进行测试

稀释系数：10

6. ELISA程序

6.1说明

1.使用前将ELISA试剂置于室温（20-25°C）。

2.使用后立即将ELISA试剂放回2-8℃

3.分析过程中ELISA的再现性在很大程度上取决于洗涤板的一致性，正确的洗涤板操作是ELISA程序确定的关键

4.在恒温培养的所有过程中，避免光照，用盖膜密封微孔板

6. 2操作步骤

1.将试剂盒在室温（20-25℃）下放置至少30分钟，注意每种试剂在使用前均应摇匀；

2.将所需的微孔板条放入板架中。重新密封未使用的微孔板，在2-8℃下保存，不要冷冻。

3.溶液制备：取40毫升20倍浓缩洗涤缓冲液，以1:19的去离子水溶解（1份20倍浓缩洗涤缓冲液+ 19份去离子水），或根据需要进行配制。

4.编号：根据样品和标准溶液对微孔编号；每个样品和标准溶液应重复两次；记录他们的位置。

5.添加标准品/样品：将50 µL样品或标准溶液添加到单独的重复孔中，然后添加酶结合物（50 µL /孔）。然后是抗体工作溶液，每孔50 µL。通过手动摇动板轻轻混合，用盖膜密封微孔板，在黑暗中于25°C孵育30分钟。

6.清洗微孔板：小心打开盖膜，将液体倒出微孔；加入每孔250 µL的洗涤缓冲液，充分洗涤4-5次，每次15-30 s，然后取出并用吸水纸拍干。（干燥后用未用过的矛头刺破气泡）

7.显色：添加50 µL底物A溶液，然后添加50 µL B