人白介素6（IL-6）抗原纯品

首先感谢您选择深圳市优品生物科技有限公司，我司为您提供优质的免疫学试剂，在您使用本产品前，请认真阅读说明书，不清楚之处，请联系技术人员解答，这对您顺利完成实验很有帮助。

名    称：人白介素6（IL-6）抗原纯品。

目 录 号：YP100006

浓    度：1mg/ml

缓 冲 液：0.01mol/L的PBS、pH：7.2、0.2%Procline-300、50%甘油。

制备方法： 大肠杆菌重组蛋白。

纯化方法：亲和纯化。

应用范围：用于细胞培养的刺激剂；用于ELISA、CLIA、WB、IHC等免疫检测。

产品纯度：不低于总蛋白的90%。

储存方法：存放在-20℃。

注意事项：避免反复冻融。

有效期限：请您在管体注明有效期内使用。

使用建议：本产品可以用于细胞水平、动物水平、蛋白水平的免疫学反应相关实验。

人白介素6（IL-6）抗原纯品一种稳定高效表达人血清白蛋白和白介素Ⅱ融合蛋白的CHO细胞株的构建方法,通过将带有人血清白蛋白和人白介素Ⅱ融合基因的质粒电转至CHO细胞中,获得稳定、高效表达人源重组蛋白的CHO单克隆细胞株。本发明获得的单克隆细胞株可以分泌表达人血清白蛋白和人白介素Ⅱ融合蛋白,蛋白表达量较高,经分离纯化所获得融合蛋白,两种融合蛋白体外生物活性均比等摩尔单体IL-2活性要高,将成为广泛应用于肿瘤、肝炎、肺炎和免疫缺陷性疾病等多种疾病治疗的药物。干扰素α2b(interferonα2b,IFNα2b)是一种用于病毒性疾病和肿瘤性疾病治疗的多功能细胞因子,因其在体内的半衰期短限制了其在临床上的应用.将IFNα2b连接到人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的C端,构建融合蛋白HSA-IFNα2b.构建含融合蛋白的真核表达质粒pMH3/HSA-IFNa2b,经电转的方法转入中国仓鼠卵巢(Chinese hamster ovary,CHO)细胞中.经G418抗性压力筛选和目的蛋白的表达量筛选,*终获得一株高表达的稳定细胞株(CHO/pMH3/HSA-IFNa2b).表达的目的蛋白经Western blot验证显示,产物具有IFNα2b和HSA的双抗原性.经悬浮驯化稳定后,通过批次筛选得到一株稳定的高克隆表达株,产量约为65mg/L,进一步选取高表达克隆株在悬浮驯化中不同代数进行批次培养,不同代数之间蛋白质的表达量和生长情况没有明显的差异,获得一株稳定遗传表达的单克隆细胞株,3L摇瓶的流加培养结果显示,*佳发酵时间为15天,蛋白质表达量为121mg/L.经离心获得的发酵液,经两步纯化后获得蛋白质纯度高达96.8％的目的蛋白,总回收率为22.3％.参照《中国药典》2015版对IFNα2b的检测方法,结果显示,CHO表达的HSA-IFNα2b比活性为4.16×106IU/mg.首次将HSA-IFNα2b在哺乳动物细胞CHO中构建表达,表达获得高活性的HSA-IFNα2b融合蛋白.


人白介素6（IL-6）抗原纯品目的对两种长效干扰素α融合蛋白原料药的理化特性多项指标开展分析和进行比较.方法利用基因工程技术分别构建了可高效表达重组人血清白蛋白/干扰素α2a融合蛋白(rHSA/IFNα2a)或重组人血清白蛋白/干扰素α2b融合蛋白(rHSA/IFNα2b)的毕赤酵母工程菌.融合蛋白直接分泌到组分简单的无机盐培养基中,并经特别建立的高效分离纯化工艺进行纯化,随后对两个融合蛋白进行详尽的理化特性分析.结果获得的融合蛋白纯度在98%以上;N端前15个氨基酸序列与理论序列相同;质谱分子量分别为85640.8D和85781.5D;圆二色光谱分析比对蛋白空间构象未变;等电点pI约在5.1左右;为非糖基化蛋白;紫外光谱呈典型蛋白质光谱;自由巯基含量测定值为1.4;肽图批次间一致;肽质量指纹图谱可匹配分别达83%和82%;对制备的2个融合蛋白原料药中的细菌内毒素,宿主蛋白质,外源性DNA,甲醇和甘油的残留量检测符合标准要求;融合蛋白的免疫学鉴别为阳性;体外细胞生物比活性约为2.5×105IU/mg,并且2个融合蛋白生物比活性测定值无不同,由此,获得了符合临床用药标准的原料药.结论研究所获得的结果可以作为指导《注射用重组人血清白蛋白/干扰素α2a融合蛋白》和《注射用重组人血清白蛋白/干扰素α2b融合蛋白》2个新药的原料药生产质量标准的建立和检定方法的确定.