资料简介：

枯草芽孢杆菌细胞壁通过TLＲ-2 -MyD88 -NF-κB / MAPK

信号通路调控绵羊瘤胃上 皮 细 胞β-防 御 素-1的 表 达

辛雅明1，2，白绥明3，白 刚2，高景鹏2，樊翀宇2，韩彩霞2，周 伟2，张文彦2，永 荣2，齐 盟1，肖 红4，杨银凤1

(1.内蒙古农业大学兽医学院 ，内蒙古 呼和浩特010018;2.鄂尔多斯市动物疫病预防控制中心 ，内蒙古 鄂尔多斯017000;3.清涧县动物疫病预防控制中心 ，陕西 榆林718399;4.鄂尔多斯市农牧技术推广中心水产技术站 ，内蒙古 鄂尔多斯017000)

摘要:为了探索枯草芽孢杆菌细胞壁诱导绵羊β-防御素-1(SBD-1) 表达的主要信号转导途径，本试验首先使用反复冻融法与超声波破碎法相结合的方法破碎枯草芽孢杆菌并收集其细胞壁，酶联免疫吸附测定(ELISA)检测方法分析细胞壁成分及其含量，然后利用实时荧光定量PCＲ(ＲT-qPCＲ) 和蛋白质免疫印迹(Western blot，WB)方法检测枯草芽孢杆菌细胞壁刺激绵羊瘤胃上皮细胞(OＲECs)后通路因子(TLＲ-2、MyD88、NF-κB、p38、JNK和EＲK1 /2)mＲNA和蛋白的表达变化，使用通路抑制剂分别阻断NF-κB、p38、JNK和EＲK1 /2信号通路，用枯草芽孢杆菌细胞壁刺激OＲECs并检测刺激后SBD-1mＲNA表达变化，从而确定诱导SBD-1表达的主要信号通路。结果显示，枯草芽孢杆菌细胞壁制备成功，细胞壁主要成分为肽聚糖和磷壁酸，含量分别为(90． 85 ± 0． 91)%和(8． 85 ± 0． 11)%。与对照组相比，枯草芽孢杆菌细胞壁刺激OＲECs后信号通路因子(TLＲ-2、MyD88、NF-κB、p38、JNK和EＲK1 /2) 的mＲNA和蛋白的表达水平均显著升高(P＜ 0. 05或P＜ 0. 01) ，使用通路抑制剂阻断各个信号通路后再刺激OＲECs，SBD-1 mＲNA表达水平均极显著下降(P＜ 0. 01) ，且添加NF-κB和JNK抑制剂组下降幅度*大。结果表明，枯草芽孢杆菌细胞壁可能通过TLＲ-2-MyD88-NF-κB/MAPK信号通路调控OＲECs SBD-1的表达。关键词:枯草芽孢杆菌细胞壁 ; 绵羊瘤胃上皮细胞 ;β-防御素-1;抑制剂; 信号通路