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人乙型脑炎病毒（JEV）试剂盒（ELISA）
使用说明书
本试剂盒用于体外定性检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人
乙型脑炎病毒（JEV）。
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断
实验原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人乙型脑炎病毒（JEV）
捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、阴性和阳性对照、HRP标记的检测抗体，经过温育并
彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成
*终的黄色。颜色的深浅和样品中的人乙型脑炎病毒（JEV）呈正相关。用酶标仪在450nm 波
长下测定吸光度（OD 值），判定阴阳性。
样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20
分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×
g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞
会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体
积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。
推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织
细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。*后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取
上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置
公司主营产品：ELISA 试剂盒，标准品，试剂，染色液，动物血制品，也可代理1 进口6品牌，还有代测服务 欢迎致电咨询 18256960116 18175256626滁州仕诺达生物科技有限公司
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于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响*后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成
名称
96 孔配置
48 孔配置
备注
微孔酶标板
96 孔
48 孔
无
阴性对照
0.3mL
0.3mL
无
阳性对照
0.3mL
0.3mL
无
样本稀释液
6mL
3mL
无
检测抗体-HRP
10mL
5mL
无
20×洗涤缓冲液
25mL
15mL
按说明书进行稀释
底物 A
6mL
3mL
无
底物 B
6mL
3mL
无
终止液
6mL
3mL
无
封板膜
2 张
2 张
无
说明书
1 份
1 份
无
自封袋
1 个
1 个
无
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室
温 20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中
不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响 OD 值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏滁州仕诺达生物科技有限公司
试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
1. 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
2. 设置阴性对照孔、阳性对照孔和样本孔，阴性、阳新对照孔各加 50μL 对照品；
3. 样本孔中加入待测样本 50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，
用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸
上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
7. 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
实验结果计算
1. 阴性对照OD值：小于0.2。
2. 阳性对照OD值：大于0.8。
3、阳性判断（Cut-Off值）：阴性对照OD值+0.15，样本OD值大于阈值，判定为阳性，反之，
为阴性。
人乙型脑炎病毒（JEV）ELISA检测试剂盒@*新新闻动态
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